背景:急性腎損傷是重癥患者最常見(jiàn)、具有高死亡風(fēng)險(xiǎn)的急危重癥。缺血性腎損傷是急性腎損傷的常見(jiàn)病因,各種原因?qū)е聶C(jī)體有效循環(huán)血量急劇下降、腎臟低灌注,即腎組織細(xì)胞缺血缺氧,均能導(dǎo)致腎小管細(xì)胞損傷,增加細(xì)胞凋亡。在能量缺乏或缺氧的壓力下,自噬啟動(dòng)維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài),然而,自噬是否參與缺血性急性腎損傷中腎小管上皮細(xì)胞凋亡尚不清楚。本文主要通過(guò)研究低氧誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞株（HK2細(xì)胞）,探討自噬與凋亡之間的關(guān)系,以進(jìn)一步闡明自噬在缺血性腎小管上皮細(xì)胞損傷中的作用。方法:本研究主要采用HK2細(xì)胞構(gòu)建的缺氧模型,Western Blot檢測(cè)HK2細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白Beclin1,LC3II/LC3I,P62,Lamp2,TFEB,mTORC1和凋亡相關(guān)蛋白cleaved-caspase3表達(dá)水平,流式細(xì)胞儀檢測(cè)HK2細(xì)胞凋亡情況;并采用qPCR檢測(cè)P62轉(zhuǎn)錄水平的變化,加用蛋白酶體抑制劑MG132阻斷泛素蛋白酶體降解途徑后,觀察低氧誘導(dǎo)的P62蛋白水平的變化;采用低氧誘導(dǎo)穩(wěn)定表達(dá)GFP-LC3的HK2細(xì)胞18h,熒光顯微鏡觀察GFP-LC3斑點(diǎn)和P62變化,電鏡觀察自噬小體變化;進(jìn)一步采用低氧聯(lián)合自噬... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

AKI的RIFLE標(biāo)準(zhǔn)

圖 1.AKI 的 RIFLE 標(biāo)準(zhǔn)。（摘自 JAKellum et al. 2012[1]）Figure 1. The RIPLE standard of AKI.( JA Kellum et al. 2012[1])性腎損傷是急性腎損傷的常見(jiàn)病因，各種原因如膿毒癥、創(chuàng)傷種因素均可導(dǎo)致機(jī)體有效循環(huán)血量急劇下降，腎臟低灌注，即氧，導(dǎo)致腎小管細(xì)胞損傷[7]。研究顯示，在缺血性急性腎損傷病刷狀緣消失，管狀細(xì)胞不規(guī)則，近端小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)血性急性腎損傷的最重要發(fā)病機(jī)制之一[8]。研究表明，缺氧是缺病理生理過(guò)程，可誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與低內(nèi)線粒體功能缺陷有關(guān)[9]。是細(xì)胞在能量缺乏或缺氧的應(yīng)激壓力下出現(xiàn)的一種通過(guò)溶酶體細(xì)胞器、蛋白質(zhì)及其他大分子物質(zhì)，維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的生理過(guò)小體、自噬小體與溶酶體融合及自噬溶酶體降解過(guò)程（圖 2）。

組比較采用方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用 LSD-t 法；檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05。統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。驗(yàn)結(jié)果氧誘導(dǎo) HK2 細(xì)胞凋亡研究采用Western Blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡指標(biāo)cleaved-caspase3表達(dá)，結(jié)果 cleaved-caspase3 蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性增加，尤其以低氧培養(yǎng) 24 h 低氧 12 h 、18 h、24 h 的 cleaved-caspase3 蛋白水平分別為(0.315±0.0(0.586±0.063)、(0.698±0.085)，較對(duì)照組(0.161±0.043)相比，差異有統(tǒng)0.019, P=0.000, P=0.000)；低氧 18 h、24 h 組與低氧 12 h 組比較，差義(P=0.001, P=0.000)；而低氧 18 h 組與低氧 24 h 組比較，差異無(wú)統(tǒng) 3)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腎缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激[J]. 胡紅林,王共先.  中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2010(15)



本文編號(hào)：3312144