目的:建立一種可反映人精子DNA損傷嚴(yán)重程度的流式細(xì)胞檢測技術(shù),并對其性能進(jìn)行評價(jià)。方法:DNA損傷精子（單鏈DNA）與熒光染料吖啶橙（AO）結(jié)合后發(fā)紅色熒光,而DNA完整精子（雙鏈DNA）與AO結(jié)合后發(fā)綠色熒光。通過對1 165例人精液樣本正常精子群的紅色熒光和綠色熒光峰圖的分析,確定紅色熒光的95%的平均上限和綠色熒光的5%的平均下限為十字象限門的紅色熒光和綠色熒光界限,建立精子DNA碎片指數(shù)（DFI）的流式細(xì)胞檢測技術(shù),并分析其重復(fù)性和線性范圍,確定正常生育男性的參考值。并對122例不育門診男性的精子DFI、輕度DNA損傷（DFIm）和重度DNA損傷（DFIs）與精子濃度及活力的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果:利用十字象限門建立的流式細(xì)胞術(shù),可以很明顯地區(qū)分不同人群的精子DFI、DFIm和DFIs。高、中、低DFI的精液樣本使用流式細(xì)胞術(shù)重復(fù)檢測10次,所得CV均低于5%。精子DFI在8.93%～53.90%范圍內(nèi)有極好的相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)r> 0.99�；�274例正常生育男性的精子DFI結(jié)果,以95%上限確定正常參考值范圍,正常生育男性精子DFI≤25.50%。精子DFI與精子濃度... 

【文章來源】：中華男科學(xué)雜志. 2020,26(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

不同人群的精子DFI流式細(xì)胞圖

現(xiàn)有的精子DFI的SCSA法的不合理性就體現(xiàn)在流式細(xì)胞結(jié)果分析上。本研究確定的流式細(xì)胞結(jié)果分析方案如下:①象限門的確定:綜觀流式細(xì)胞術(shù)相關(guān)圖書[8-9],對各類細(xì)胞的分析幾乎毫無例外地采用十字象限門,精子作為人類細(xì)胞的一種同樣適用。十字象限門的關(guān)鍵是確定十字象限的交叉點(diǎn),對AO染色的精子而言,就是正常精子最低綠色熒光和最高紅色熒光的界限,低于此界限的非特異熒光基本來自細(xì)胞碎片或微小顆粒雜質(zhì),這部分在進(jìn)行細(xì)胞分析時(shí)應(yīng)予扣除�；诖�,本研究基于大量樣本(1 165例)的正常精子群的綠色熒光和紅色熒光峰圖,確定綠色熒光的5%的平均下限和紅色熒光的95%的平均上限為十字象限門的綠色熒光和紅色熒光界限(圖1)。②DFI的確定:十字象限門一旦確定,各象限的細(xì)胞特性基本確定,Q3-3象限為非特異性熒光,予以扣除;Q3-1象限為正常精子,精子DNA未斷裂,AO結(jié)合量少而呈綠色熒光;Q3-2為DNA部分?jǐn)嗔鸭?xì)胞,熒光顯微鏡下細(xì)胞核被染成桔黃色,這部分細(xì)胞的DNA有可能被修復(fù)[12],我們稱之為輕度DNA損傷精子(mild DNA fragmentation,DFIm);Q3-4為含碎片化DNA細(xì)胞,熒光顯微鏡下細(xì)胞核被染成紅色,我們稱之為重度DNA損傷精子(severe DNA fragmentation,DFIs)。Q3-2和Q3-4象限的精子均應(yīng)為DNA發(fā)生斷裂的精子,兩者之和即為DFI。1.4 精子DFI流式細(xì)胞術(shù)檢測的重復(fù)性分析

見表3、4。精子DFI與精子濃度沒有顯著相關(guān)性,但與精子活動率和前向運(yùn)動精子百分率呈顯著負(fù)相關(guān),尤以DFIs與精子活動率和前向運(yùn)動精子百分率的相關(guān)性更高。進(jìn)一步以精子活動率和前向運(yùn)動精子百分率正常與否分組,觀察兩組的DFI、DFIm和DFIs的差異,結(jié)果顯示,精子活動率和前向運(yùn)動精子百分率降低組的精子DFI、DFIm和DFIs均顯著高于精子活動率和前向運(yùn)動精子百分率正常組,尤以DFIs的差異最為顯著。圖4 正常生育男性精子DFI參考值的確定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3286725