目的piRNA作為非編碼小RNA（small non-coding RNA,sncRNA）家族的一員,參與基因表達調(diào)控。piRNAs在組織損傷中作用已有廣泛研究,但piRNAs在急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）中的作用尚未報道。本文旨在檢測piR-hsa-1282在AKI患者血清標本和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)人腎小管上皮細胞HK-2和人胚腎細胞293T急性損傷中的表達,探討piR-hsa-1282參與急性腎損傷發(fā)展的作用機制。同時檢測不同急性腎損傷小鼠模型中piR-mmu-36656450（piR-hsa-1282的小鼠同源性序列）表達情況,并分析其表達水平與腎損傷程度的相關(guān)性,揭示piR-hsa-1282/piR-mmu-36656450作為診斷標志物的潛在價值,為臨床治療急性腎損傷提供新靶點。方法建立piR-hsa-1282/piR-mmu-36656450的實時熒光定量RT-PCR（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

piRNA的形成途徑[42]

江 蘇 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文melting curve of piR-mmu-36656450; (C) piR-mmu-36656450 sequencing.3.3.2 piR-hsa-1282/piR-mmu-36656450 在 AKI 中的表達qRT-PCR檢測臨床AKI患者血清中的piR-hsa-1282的表達情況，檢測結(jié)果顯示，與健康人相比，piR-hsa-1282在AKI患者血清中表達上調(diào)(圖3.6A)。同時在AKI動物模型中檢測表明，CLP-AKI組中piR-mmu-36656450的表達明顯高于假手術(shù)組(圖3.6B)。piR-mmu-36656450在順鉑誘導(dǎo)急性腎損傷小鼠模型中具有相同的表達趨勢(圖3.6B)。

HE切片結(jié)果顯示，隨著術(shù)后時間越長，小鼠腎小管空泡壞死越嚴重(圖3.7A)。免疫熒光檢測cleaved caspase3在術(shù)后24h表達量最高(圖3.7B)。血清BUN和Cre水平也呈現(xiàn)時間依賴性升高(圖3.7C)。qRT-PCR結(jié)果表明CLP組小鼠的piR-mmu-36656450表達逐漸上調(diào),并且在24h有40倍率的改變(圖3.7D)。圖3.7 CLP AKI小鼠動態(tài)模型構(gòu)建和piR-mmu-36656450的表達檢測（A）HE染色檢測小鼠腎臟損傷程度：a:sham組，b:CLP 6h組,c:CLP 12h組,d:CLP 24h組（放大倍數(shù)：×200，標尺=50 μm）；(B)免疫熒光檢測CLP小鼠不同時間點cleaved caspase3的表達；(C)不同時間點的CLP小鼠血清BUN、Cre水平(*P<0.05); (D)qRT-PCR檢測不同時間點CLP小鼠腎臟組織中piR-mmu-36656450的表達(*P<0.05)；


本文編號：3275189