本文關(guān)鍵詞：Angiopoietin-1對糖尿病大鼠腎臟缺氧狀態(tài)及其微血管滲漏性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構(gòu)建糖尿病腎病大鼠模型,給予Angiopoietin-1(Ang-1)腺病毒表達(dá)載體并活體靜脈注射伊文思藍(lán)(EB),觀察腎臟缺氧相關(guān)指標(biāo)以及EB含量變化,評估Ang-1對腎臟缺氧狀態(tài)及其微血管滲漏性的影響。方法:構(gòu)建并鑒定高效表達(dá)Ang-1腺病毒載體(Ad-Ang-1)。使用鏈脲菌素(STZ)腹腔注射誘導(dǎo)構(gòu)建SD大鼠糖尿病模型。設(shè)正常對照組(NC)、糖尿病組(DN)、糖尿病Ang-1干預(yù)組(AV)及糖尿病空腺病毒組(BV)。AV組成模8周后經(jīng)陰莖靜脈注射Ad-Ang-1(3×108 pfu/只)。分別于12周末、16周末處死大鼠,采集血、尿標(biāo)本,比較各組間血糖、肌酐、尿素、胰島素、胰高血糖素、生長激素、甲狀腺素水平及尿腎損傷因子1(KIM-1)和24小時尿蛋白的變化;留取腎組織標(biāo)本,常規(guī)染色觀察腎臟病理,缺氧探針觀察腎臟缺氧狀況,免疫組化及熒光、免疫印跡(WB)測定腎組織中低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、血紅素加氧酶-1(HO-1)、脯氨酸羥化酶2(PHD2)的蛋白水平,實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time PCR)方法測定腎組織中HIF-1α、HO-1、PHD2的m RNA水平;通過伊文思藍(lán)(EB)活體靜脈注入,取腎組織均漿,分光度計(jì)檢測其含量。結(jié)果:1.主要血、尿指標(biāo):1三個糖尿病模型組血糖、24小時尿蛋白均明顯高于NC組(P0.01),但各模型組間無明顯差異(P0.05)。2各組大鼠組間血肌酐水平無明顯差異(P0.05),但AV、BV組16w高于12w(P0.05);AV組血尿素水平高于NC、DN組(P0.05)。3NC組血胰島素水平高于三個模型組,但僅與DN組12w時存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);各組血胰高血糖素、生長激素水平無明顯差異(P0.05);BV組12w時甲狀腺素水平明顯高于其他三個組(P0.01)。4三個糖尿病模型組尿KIM-1水平均明顯升高,且AV組顯著高于DN、BV組(P0.01),DN組16w時明顯高于12w(P0.05)。2.腎臟病理:模型組大鼠腎臟明顯腫大、發(fā)白,且腎重指數(shù)顯著高于NC組(P0.01),可見不同程度的腎小球增大、系膜基質(zhì)增多、細(xì)胞數(shù)增多、部分腎小管擴(kuò)張、顆粒和空泡變性,AV組病理改變相對減輕。3.缺氧探針免疫組化:NC組主要著染于內(nèi)髓及皮髓交界區(qū),而模型組陽性染色范圍擴(kuò)大至皮質(zhì)區(qū),其中AV組腎臟缺氧探針陽性染色面積明顯低于DN、BV組(P0.01)。4.缺氧反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)免疫組化/熒光及WB:1HIF-1α突出表達(dá)于腎小管、腎小球細(xì)胞核及部分腎小管胞漿,三個糖尿病模型組腎組織表達(dá)較NC組均明顯上調(diào)(P㩳0.01),其中AV組上調(diào)顯著高于DN、BV組(P㩳0.05),且16w較12w下調(diào)(P㩳0.05)。2HO-1主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿,三個糖尿病模型組腎組織表達(dá)較NC組均明顯上調(diào)(P㩳0.05),其中AV組上調(diào)顯著高于DN、BV組(P㩳0.05),16w較12w下調(diào)(P㩳0.05)。3PHD2主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿,DN、BV組表達(dá)較NC組均明顯上調(diào)(P㩳0.01),AV組顯著低于DN、BV組(P㩳0.01)。5.缺氧反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)Real-Time PCR:1三個糖尿病模型組腎組織HIF-1αm RNA表達(dá)均較NC組升高,但僅AV組存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P㩳0.05),16w時AV組顯著高于DN、BV組(P㩳0.05)。2三個糖尿病模型組腎組織HO-1 m RNA表達(dá)均較NC組升高,但僅AV組16w時有明顯學(xué)差異(P㩳0.05)。3三個糖尿病模型組腎組織PHD2 m RNA表達(dá)均較NC組升高,但僅DN、BV組有明顯差異(P㩳0.05),12w時AV組明顯低于DN組(P㩳0.05)。6.腎臟微血管滲漏性:EB灌注后,NC組于腎盂、腎盞處可見明顯藍(lán)染,三個模型組皮質(zhì)和髓質(zhì)區(qū)域均被廣泛藍(lán)染,但AV組藍(lán)染程度較DN、BV組減輕;三個糖尿病模型組腎組織中EB含量均高于NC組,其中DN、BV組升高明顯(P㩳0.05),而AV組明顯低于DN、BV組(P㩳0.05)。結(jié)論:1.糖尿病大鼠腎臟存在慢性缺氧,Ang-1可改善糖尿病大鼠腎臟缺氧狀態(tài);2.Ang-1改善糖尿病大鼠腎臟缺氧狀態(tài)可能與上調(diào)HIF-1α及HO-1表達(dá),抑制PHD2表達(dá)相關(guān);3.Ang-1可改善糖尿病大鼠腎臟微血管滲漏性;4.Ang-1對糖尿病大鼠血胰島素、胰高血糖素、生長激素、甲狀腺素水平影響不明顯。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎臟疾病 缺氧 促血管生成素-1 低氧誘導(dǎo)因子-1α 血管滲漏性
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中英文縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-24
• 結(jié)果24-54
• 討論54-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 綜述65-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 致謝72-73
• 作者簡介73

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：Angiopoietin-1對糖尿病大鼠腎臟缺氧狀態(tài)及其微血管滲漏性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326773