目的:通過(guò)不同濃度的骨化三醇在不同時(shí)間點(diǎn)體外干預(yù)DU145及PC-3細(xì)胞,評(píng)價(jià)其對(duì)兩種前列腺癌細(xì)胞增殖及死亡效應(yīng)的影響,進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。希望通過(guò)合理的聯(lián)合用藥,優(yōu)化骨化三醇的抗腫瘤效應(yīng)。為臨床治療晚期前列腺癌提供新的思路和理論支持,促進(jìn)臨床轉(zhuǎn)化。方法:選擇DU145及PC-3細(xì)胞。體外擴(kuò)增至足夠數(shù)量。對(duì)兩種前列腺癌細(xì)胞實(shí)施不同濃度骨化三醇干預(yù)。在不同的時(shí)間點(diǎn)通過(guò)CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖率,臺(tái)盼蘭染色計(jì)算細(xì)胞總死亡率,PI染色分析細(xì)胞周期分布,Annexin V流式細(xì)胞儀檢測(cè)早期凋亡。通過(guò)westernblot技術(shù),分析兩種細(xì)胞凋亡和自噬信號(hào)通路的激活的狀況。進(jìn)一步通過(guò)氯喹阻斷PC-3自噬信號(hào)通路,明確其是否有增敏骨化三醇的抗腫瘤效應(yīng)。結(jié)果:骨化三醇體外干預(yù)72小時(shí)內(nèi),促進(jìn)DU145細(xì)胞增殖,抑制凋亡,對(duì)自噬信號(hào)通路無(wú)明顯影響。骨化三醇抑制PC-3細(xì)胞增殖,促進(jìn)自噬,對(duì)凋亡信號(hào)通路無(wú)明顯影響。骨化三醇聯(lián)合氯喹較單獨(dú)應(yīng)用骨化三醇或氯喹能更好的抑制PC-3細(xì)胞的增殖,并促進(jìn)其通過(guò)自噬上游激活同時(shí)自噬下游抑制來(lái)提高細(xì)胞死亡率。結(jié)論:骨化三醇通過(guò)促進(jìn)增殖、抑制凋亡,促進(jìn)DU145細(xì)胞進(jìn)展。骨... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
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英文縮寫詞表
緒論
第一部分 骨化三醇對(duì)DU145、PC-3 細(xì)胞生存及死亡的功能學(xué)研究
    1 主要實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 體外細(xì)胞培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇
        2.2 細(xì)胞增殖率檢測(cè)
        2.3 細(xì)胞死亡率檢測(cè)
        2.4 細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.5 細(xì)胞早期凋亡檢測(cè)（Annexin V/PI）
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)評(píng)估
        3.2 細(xì)胞增殖率檢測(cè)結(jié)果
        3.3 細(xì)胞死亡率檢測(cè)結(jié)果
        3.4 細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果
        3.5 細(xì)胞早期凋亡檢測(cè)結(jié)果
    4 第一部分討論
第二部分 骨化三醇通過(guò)凋亡及自噬信號(hào)通路的調(diào)控影響細(xì)胞生存及死亡的機(jī)制研究
    1 主要實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 人前列腺癌標(biāo)本免疫組化染色
        2.2 PC-3 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)
        2.3 凋亡及自噬信號(hào)通路分子檢測(cè)
        2.4 骨化三醇聯(lián)合氯喹通過(guò)自噬通路調(diào)節(jié)促進(jìn)PC-3 細(xì)胞死亡的分子機(jī)制
        2.5 骨化三醇聯(lián)合氯喹干預(yù)對(duì)PC-3 細(xì)胞增殖及總死亡率的影響
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 人體標(biāo)本免疫組化染色結(jié)果
        3.2 PC-3 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)結(jié)果
        3.3 凋亡及自噬信號(hào)通路分子western檢測(cè)結(jié)果
        3.4 骨化三醇聯(lián)合氯喹作用后自噬通路分子western檢測(cè)結(jié)果
        3.5 骨化三醇聯(lián)合氯喹干預(yù)PC-3 細(xì)胞后增殖及總死亡率的檢測(cè)結(jié)果
    4 第二部分討論
全文小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3207964