目的:通過不同濃度的骨化三醇在不同時間點體外干預(yù)DU145及PC-3細(xì)胞,評價其對兩種前列腺癌細(xì)胞增殖及死亡效應(yīng)的影響,進(jìn)一步探討其作用機制。希望通過合理的聯(lián)合用藥,優(yōu)化骨化三醇的抗腫瘤效應(yīng)。為臨床治療晚期前列腺癌提供新的思路和理論支持,促進(jìn)臨床轉(zhuǎn)化。方法:選擇DU145及PC-3細(xì)胞。體外擴增至足夠數(shù)量。對兩種前列腺癌細(xì)胞實施不同濃度骨化三醇干預(yù)。在不同的時間點通過CCK-8檢測細(xì)胞增殖率,臺盼蘭染色計算細(xì)胞總死亡率,PI染色分析細(xì)胞周期分布,Annexin V流式細(xì)胞儀檢測早期凋亡。通過westernblot技術(shù),分析兩種細(xì)胞凋亡和自噬信號通路的激活的狀況。進(jìn)一步通過氯喹阻斷PC-3自噬信號通路,明確其是否有增敏骨化三醇的抗腫瘤效應(yīng)。結(jié)果:骨化三醇體外干預(yù)72小時內(nèi),促進(jìn)DU145細(xì)胞增殖,抑制凋亡,對自噬信號通路無明顯影響。骨化三醇抑制PC-3細(xì)胞增殖,促進(jìn)自噬,對凋亡信號通路無明顯影響。骨化三醇聯(lián)合氯喹較單獨應(yīng)用骨化三醇或氯喹能更好的抑制PC-3細(xì)胞的增殖,并促進(jìn)其通過自噬上游激活同時自噬下游抑制來提高細(xì)胞死亡率。結(jié)論:骨化三醇通過促進(jìn)增殖、抑制凋亡,促進(jìn)DU145細(xì)胞進(jìn)展。骨... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫詞表
緒論
第一部分 骨化三醇對DU145、PC-3 細(xì)胞生存及死亡的功能學(xué)研究
    1 主要實驗材料與設(shè)備
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 體外細(xì)胞培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇
        2.2 細(xì)胞增殖率檢測
        2.3 細(xì)胞死亡率檢測
        2.4 細(xì)胞周期檢測
        2.5 細(xì)胞早期凋亡檢測（Annexin V/PI）
        2.6 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 實驗結(jié)果
        3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)評估
        3.2 細(xì)胞增殖率檢測結(jié)果
        3.3 細(xì)胞死亡率檢測結(jié)果
        3.4 細(xì)胞周期檢測結(jié)果
        3.5 細(xì)胞早期凋亡檢測結(jié)果
    4 第一部分討論
第二部分 骨化三醇通過凋亡及自噬信號通路的調(diào)控影響細(xì)胞生存及死亡的機制研究
    1 主要實驗材料和設(shè)備
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗設(shè)備
    2 實驗方法
        2.1 人前列腺癌標(biāo)本免疫組化染色
        2.2 PC-3 細(xì)胞免疫熒光檢測
        2.3 凋亡及自噬信號通路分子檢測
        2.4 骨化三醇聯(lián)合氯喹通過自噬通路調(diào)節(jié)促進(jìn)PC-3 細(xì)胞死亡的分子機制
        2.5 骨化三醇聯(lián)合氯喹干預(yù)對PC-3 細(xì)胞增殖及總死亡率的影響
        2.6 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 實驗結(jié)果
        3.1 人體標(biāo)本免疫組化染色結(jié)果
        3.2 PC-3 細(xì)胞免疫熒光檢測結(jié)果
        3.3 凋亡及自噬信號通路分子western檢測結(jié)果
        3.4 骨化三醇聯(lián)合氯喹作用后自噬通路分子western檢測結(jié)果
        3.5 骨化三醇聯(lián)合氯喹干預(yù)PC-3 細(xì)胞后增殖及總死亡率的檢測結(jié)果
    4 第二部分討論
全文小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3207964