發(fā)布時間：2021-05-21 15:56

　　去勢抵抗性前列腺癌（CRPC）是前列腺癌經(jīng)前期雄激素剝奪治療后對雄激素非依賴型的癌癥,后期發(fā)生轉(zhuǎn)移的概率極高,迫切需要尋找新的創(chuàng)新性治療策略。嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法（CAR-T）在治療血液瘤中顯示出顯著的功效,為腫瘤治療提供了新的可能性。但在前列腺癌這類淋巴細(xì)胞浸潤程度低的冷腫瘤中效果卻不理想。不同的細(xì)胞因子或趨化因子已顯示出可增強(qiáng)T細(xì)胞的增殖、存活和腫瘤浸潤等不同的功能。我們對CRPC患者來源的CD4⁺和CD8⁺T細(xì)胞進(jìn)行了改造,使其在表達(dá)靶向PSMA的CAR結(jié)構(gòu)的同時表達(dá)IL-7和CCL19,提高CAR-T細(xì)胞的存活和浸潤能力,進(jìn)而將腫瘤從“冷”變“熱”,以克服目前CAR-T在CRPC治療中存在的浸潤低、增殖能力差等問題。我們設(shè)計了表達(dá)嵌合抗原受體的慢病毒載體,該載體使用2A肽序列串聯(lián)三個組分,實現(xiàn)IL-7和CCL19與PSMA特異的CAR序列的共同表達(dá)。制備出了滴度較高的慢病毒,并通過這些慢病毒感染從病人外周血分離的CRPC-T細(xì)胞獲得了陽性率在60%以上的7?19-PSMA-CAR-T細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)7?19-PSMA-CAR-T細(xì)... 

【文章來源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 前言
    1.1 前列腺癌
        1.1.1 概述
        1.1.2 前列腺癌的治療現(xiàn)狀
        1.1.3 mCRPC的治療方法
    1.2 嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法
        1.2.1 概述
        1.2.2 CAR-T細(xì)胞的發(fā)展
        1.2.3 CAR-T細(xì)胞的成果與挑戰(zhàn)
    1.3 CAR-T細(xì)胞治療前列腺癌
        1.3.1 前列腺膜特異性膜抗原
        1.3.2 靶向PSMA的 CAR-T治療前列腺癌的研究進(jìn)展
        1.3.3 CAR-T治療前列腺癌的困境
    1.4 IL-7和CCL19
        1.4.1 IL-7
        1.4.2 CCL9
    1.5 實驗課題的目標(biāo)與思路
第二章 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞的體外抗腫瘤功能研究
    引言
    2.1 實驗材料
        2.1.1 慢病毒質(zhì)粒
        2.1.2 細(xì)胞及菌株
        2.1.3 實驗試劑和耗材
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 實驗試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 CJ-7×19 慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 慢病毒的包裝和滴度的測定
        2.2.3 CAR-T細(xì)胞的制備
        2.2.4 細(xì)胞因子的檢測
        2.2.5 CAR-T細(xì)胞殺傷功能的檢測
        2.2.6 CAR-T細(xì)胞活化后GzmB和 IFN-γ的表達(dá)水平的檢測
        2.2.7 CAR-T細(xì)胞增殖能力的檢測
        2.2.8 CAR-T細(xì)胞分化能力的檢測
        2.2.9 CAR-T細(xì)胞耗竭水平的檢測
        2.2.10 CAR-T細(xì)胞誘導(dǎo)遷移能力的檢測
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 CJ-7×19 質(zhì)粒的CAR結(jié)構(gòu)設(shè)計
        2.3.2 病毒滴度的檢測
        2.3.3 制備的CAR-T細(xì)胞CAR表達(dá)的檢測
        2.3.4 CAR-T細(xì)胞分泌IL-7和CCL19 的檢測
        2.3.5 人前列腺癌細(xì)胞系的PSMA表達(dá)
        2.3.6 兩種CAR-T細(xì)胞對三種靶細(xì)胞的殺傷效果
        2.3.7 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞有相同細(xì)胞因子釋放
        2.3.8 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞具有增強(qiáng)的增殖能力
        2.3.9 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞具有更高比例的初始記憶性T細(xì)胞
        2.3.10 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞呈現(xiàn)出更低的耗竭表型
        2.3.11 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞具有招募免疫細(xì)胞的能力
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞的體內(nèi)抗腫瘤功能研究
    引言
    3.1 實驗材料
        3.1.1 小鼠
        3.1.2 實驗試劑和耗材
        3.1.3 實驗儀器
        3.1.4 溶液的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 小鼠腫瘤模型
        3.2.2 小鼠的治療
        3.2.3 腫瘤體積的記錄
        3.2.4 小鼠體內(nèi)指標(biāo)的檢測
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 7×19-PSMA-CAR-T特異性殺傷PSMA+腫瘤
        3.3.2 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞具有增強(qiáng)的腫瘤消退的能力
        3.3.3 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞療法不引起體重的降低
        3.3.4 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞分泌更多的GzmB和 IFN-γ
        3.3.5 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞表現(xiàn)出更高比例的殺傷表型
        3.3.6 7×19-PSMA-CAR-T細(xì)胞有更強(qiáng)的腫瘤浸潤能力
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 全文總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間學(xué)術(shù)成果及科研項目


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]靶向免疫檢查點的腫瘤免疫治療現(xiàn)狀與趨勢[J]. 任軍,黃紅艷.  中國腫瘤臨床. 2014(07)

碩士論文
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本文編號：3199981