目的:探討小泛素化特異性蛋白酶（SENP1）對(duì)腎血管球發(fā)育的調(diào)控,研究SENP1在后腎發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律。方法:隨機(jī)取孕鼠,分別收集E13.5d、E14.5d、E16.5d、E18.5d胚胎小鼠的腎臟,及Pld、P7d、P14d、P21d、P28d幼年小鼠腎臟,利用RT-PCR技術(shù)測定目的基因SENP1各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá),觀察mRNA隨腎臟發(fā)育的變化規(guī)律;利用Western Blot技術(shù)測定目的蛋白SENP1、HIF-2α各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá),觀察蛋白表達(dá)隨腎臟發(fā)育的變化規(guī)律;利用免疫組化、免疫熒光技術(shù),定位目的蛋白的表達(dá)部位,觀察其隨著腎臟發(fā)育的變化規(guī)律。結(jié)果:隨著小鼠胚胎腎臟發(fā)育成熟,SENP1mRNA穩(wěn)定表達(dá)（p>0.05）;隨著小鼠胚胎腎臟發(fā)育成熟,SENP1蛋白表達(dá)逐漸減低（p<0.05）,HIF-2α蛋白表達(dá)逐漸減低（p<0.05）,兩者變化趨勢基本一致;但免疫熒光、免疫組化定位SENP1未得到陽性結(jié)果。結(jié)論:隨著小鼠胚胎腎臟發(fā)育成熟,SENP1、HIF-2α出現(xiàn)較為一致的變化規(guī)律,說明SENP1、HIF-2α和腎臟發(fā)育具有一定時(shí)間相關(guān)性,提示SENP1對(duì)于小鼠胚胎腎... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1. 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 其他材料
    2. 方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理及標(biāo)本留取
        2.2 胚腎組織RNA提取和cDNA合成
        2.3 擴(kuò)增cDNA片段,目的基因SENP1,凝膠成像
        2.4 冰凍切片免疫熒光染色
        2.5 石蠟切片免疫組化染色（ABC法）
        2.6 胚腎蛋白Western Blot
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.RT-PCR檢測SENP1 mRNA在胚腎發(fā)育各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況
    2. Western Blot檢測目的基因SENP1在胚腎發(fā)育各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況
    3.利用VVestcrn Ulot檢測目的基因HIF-2α在胚腎發(fā)育各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況
    4. 使用免疫組化,檢測目的基因的蛋白表達(dá)及定位
    5. 使用免疫熒光,檢測目的基因的蛋白表達(dá)及定位
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3147235