第一部分草酸鈣激活腎小管上皮細(xì)胞NADPH氧化酶介導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)成石相關(guān)蛋白表達(dá)的作用研究【目的】探究NADPH氧化酶及細(xì)胞氧化應(yīng)激在草酸鈣誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞成石相關(guān)蛋白表達(dá)中的作用及機(jī)制【方法】采用草酸鈣晶體處理NRK-52E細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量（DCFH-DA探針）,檢測(cè)細(xì)胞SOD、CAT、MDA含量及培養(yǎng)上清8-OHd G含量,共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號(hào)強(qiáng)度,real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞AT1R表達(dá),western blot檢測(cè)細(xì)胞AT1R、NAPDH氧化酶亞基（nox2和nox4）、NF-κB通路亞基（p50和p65）和成石相關(guān)蛋白（OPN、CD44和MCP-1）表達(dá);同時(shí),采用NADPH氧化酶抑制劑apocynin處理細(xì)胞,觀察其對(duì)上述指標(biāo)的變化影響。采用腹腔注射乙醛酸法構(gòu)建高草酸尿腎結(jié)石大鼠模型,Elisa法檢測(cè)大鼠血清Ang Ⅱ濃度,western blot及免疫組化染色檢測(cè)大鼠腎臟組織內(nèi)AT1R表達(dá)�！窘Y(jié)果】草酸鈣處理誘導(dǎo)NRK-52E細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增加,細(xì)胞SOD和CAT活性降低,而MDA及8-OHd G含量升高。weste... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

-1不同濃度AngII處理對(duì)NRK-52E細(xì)胞ROS產(chǎn)生的影響

濃度無(wú)明顯影響。本研究采取1 nM Ang II作為生理濃度Ang II，后續(xù)試驗(yàn)采取含 1 nM Ang II 培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞以模擬細(xì)胞生理狀態(tài)。圖1-1-2 不同濃度Ang II處理對(duì)NRK-52E細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的影響。采用不同濃度AngII（0 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1000 nM）處理NRK-52E細(xì)胞6h，流式細(xì)胞術(shù)（Fluo-3AM探針）檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。當(dāng)Ang II濃度達(dá)到10 nM時(shí)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度明顯升高，且Ca2+濃度隨著Ang II濃度增加而升高；Ang II≤1 nM對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度無(wú)明顯影響。*表示與對(duì)照組相比 < 0.05。2. 不同 CaOx 處理對(duì) NRK-52E 細(xì)胞 ROS 產(chǎn)生的影響采用不同濃度（0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM）或不同時(shí)間（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h）CaOx 處理 NRK-52E 細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)（DCFH-

NRK-52E細(xì)胞內(nèi)ROS含量與對(duì)照組相比明顯升高，差異具有顯著性（P<0.05）。本研究后續(xù)試驗(yàn)采取含 1 mM CaOx 處理 NRK-52E 細(xì)胞 6h。圖1-2 不同濃度或不同時(shí)間CaOx處理對(duì)NRK-52E細(xì)胞ROS產(chǎn)生的影響。(a)采用不同濃度CaOx（0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM）處理NRK-52E細(xì)胞6h，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS含量。(b)采用1 mM CaOx處理NRK-52E細(xì)胞不同時(shí)間（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h），流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)ROS含量。結(jié)果顯示，當(dāng)CaOx濃度達(dá)到1 mM時(shí)，NRK-52E細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯升高，且呈濃度依賴(lài)性；當(dāng)CaOx處理時(shí)間達(dá)到6h時(shí)，NRK-52E細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯升高，且呈時(shí)間依賴(lài)性。*表示與對(duì)照組相比 < 0.05。3. CaOx 處理對(duì) NRK-52E 細(xì)胞氧化還原系統(tǒng)的影響3.1. CaOx 處理對(duì) NRK-52E 細(xì)胞 ROS 產(chǎn)生的影響NADPH 氧化酶是細(xì)胞內(nèi) ROS 的重要來(lái)源之一


本文編號(hào)：3139590