目的:膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見腫瘤,發(fā)病率僅次于前列腺癌。雖然膀胱癌的診治方法在不斷改善,但是高復(fù)發(fā)及進(jìn)展率仍是影響臨床膀胱癌治療的重要障礙。近些年,多種生物分子被研究證實(shí)在膀胱癌的進(jìn)展中起作用并與患者的預(yù)后相關(guān)。但是,目前這些分子作為生物靶點(diǎn)的治療效果及生物標(biāo)志物的預(yù)測作用并不理想。我們的前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),一種蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶,STK32C的基因在TCGA數(shù)據(jù)庫膀胱癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá),并猜測其可能在膀胱癌中起一定的作用。因此,本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)探討了:STK32C蛋白在膀胱癌患者癌組織及癌旁的表達(dá)情況。通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),探討了STK32C對膀胱癌T24和5637細(xì)胞增殖,凋亡,侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。進(jìn)一步,初步探究了STK32C在膀胱癌中發(fā)揮作用的可能的分子通路。方法:1.首先,收集了TCGA數(shù)據(jù)庫中414例膀胱癌患者的m RNA表達(dá)數(shù)據(jù)及患者的臨床信息,通過對數(shù)據(jù)進(jìn)行整合分析,對STK32C基因在膀胱癌組織及癌旁的表達(dá)量進(jìn)行比較。2.從臨床獲得膀胱癌患者術(shù)后膀胱癌及癌旁組織16例,通過免疫組化方法對組織樣本的STK32C蛋白的表達(dá)量進(jìn)行評定。比較STK32C在患者癌組織及癌旁中表達(dá)的差異。3... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

TCGA數(shù)據(jù)庫分析顯示，STK32C基因mRNA在膀胱癌及癌旁組織的表達(dá)情況（A）414例膀胱癌組織和19例癌旁組織中STK32C基因表達(dá)

1.2.2 人組織免疫組化揭示 STK32C 蛋白在癌及癌旁組織的表達(dá)情況從臨床獲取膀胱癌病人 16 例患者的術(shù)后癌及癌旁組織樣本。根據(jù)病理分期，16 例患者其中包括 9 例肌層非浸潤性患者（T1 期），4 例 T23 例 T3 期患者。腫瘤病理分級上，5 例為低級別，11 例為高級別。對樣本進(jìn)行石蠟包埋，切片，并做免疫組化分析。在顯微鏡下觀察免疫組對于每組病人，隨機(jī)在低倍鏡視野下選取4個隨機(jī)點(diǎn)，并在高倍鏡下評估蛋白表達(dá)水平。典型的免疫組化圖片如下所示，我們發(fā)現(xiàn) STK32C 在膀常組織中表現(xiàn)為低表達(dá)（圖 2.1.A），而在癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)（圖 2對免疫組化結(jié)果量化分析顯示，STK32C 蛋白在膀胱癌組織中表達(dá)量明旁正常組織（P<0.01）（圖 2.2.A）。與 TCGA 數(shù)據(jù)庫的分析結(jié)果一致人膀胱癌組織中證實(shí)了 STK32C 蛋白的高表達(dá)情況。根據(jù)腫瘤的病理人分組，量化結(jié)果顯示，低級別膀胱癌病人 STK32C 蛋白的表達(dá)量低于胱癌患者（P<0.05）（圖 2.2.B）。此外，我們發(fā)現(xiàn) STK32C 蛋白表達(dá)有分期越差，表達(dá)量越高的趨勢。但由于樣本量較小，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果并無實(shí)

圖 2.2：免疫組化結(jié)果量化柱形圖。（A）STK32C 蛋白在不同病理分組織及癌旁組織中表達(dá)情況量化結(jié)果。（B）不同病理級別，STK32C達(dá)情況量化結(jié)果。*P<0.05, **P<0.01。1.2.3 構(gòu)建 STK32C 穩(wěn)定敲低的膀胱癌 T24 和 5637 細(xì)胞系為了更好的研究 STK32C 對膀胱癌細(xì)胞功能的影響，我們通過司構(gòu)建了 STK32C 敲低（shSTK32C）慢病毒載體。用攜帶 shSTK32照的慢病毒分別轉(zhuǎn)染膀胱癌 T24 和 5637 細(xì)胞系，72h 后在熒光顯微染效率。熒光顯示轉(zhuǎn)染率效率>80%且生長狀態(tài)良好的細(xì)胞被選取，STK32C 敲低和后續(xù)的體外生物功能實(shí)驗(yàn)（圖 3.1）。如圖所示，證實(shí)染過程有較高的感染效率。


本文編號：3135865