目的：miRNA在基因調(diào)控中起著關(guān)鍵作用,同樣線粒體轉(zhuǎn)錄因子A （TFAM）是線粒體DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中的必要因素。但是兩者之間的關(guān)系及其在膀胱癌中的作用并不明確。本研究旨在闡明miR-590-3p和TFAM對膀胱癌的作用并探討其分子機(jī)制。方法：1、采用Real-time PCR檢測miR590-3p和West-Blot檢測TFAM在正常組織、癌旁組織及不同分期的膀胱癌組織中的表達(dá)情況。2、采用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證miR-590-3p與TFAM之間的調(diào)控關(guān)系。3、構(gòu)建miR-590-3p過表達(dá)慢病毒載體和TFAM過表達(dá)質(zhì)粒載體4、采用MTT法、流式細(xì)胞檢測法、TransWell法等常用方法對慢病毒感染和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的人膀胱癌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),從細(xì)胞生長、細(xì)胞周期、侵襲能力、克隆形成的方面來檢測miR-590-3p靶向調(diào)控TFAM對膀胱癌生物學(xué)行為的影響。5、用Western-Blot方法來檢測轉(zhuǎn)染了miR-590-3p過表達(dá)慢病毒和TFAM過表達(dá)質(zhì)粒的膀胱癌5637細(xì)胞中PI3K/、p-PI3K、AKT、 p-AKT、MMP-2、MMP-9等因子的表達(dá)情況,來初步探尋其兩者的調(diào)控信號... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

RNA提取電泳圖

以p<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)依照均值繪制柱狀圖。其中Normal正常組織；Tumor adjcent為癌旁組織；T1為膀胱癌T1期；T2a為膀胱癌T2a期T2b為膀胱癌T2b期。2.2.3.2 Real-time PCR 反應(yīng)結(jié)果曲線如下（見閣 2-2、2-3、2-4、2-5)

我們從以上各幅圖中看到，擴(kuò)增曲線結(jié)果顯示，與陰性對照U6相比無信號，S型曲線平滑；而溶點(diǎn)曲線結(jié)果顯示，目標(biāo)曲線無雜峰。所以我光定量PCR反應(yīng)中目的基因miR-590-3p得到了有效的擴(kuò)增，且擴(kuò)增產(chǎn)，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信。.3.3 miR590-3P在不同組織標(biāo)本中的表達(dá)如下（見圖2-6):


本文編號：3134330