前列腺癌是男性發(fā)病率第二位的惡性腫瘤，我國前列腺癌發(fā)病率也逐年升高，其發(fā)病增長率已居泌尿生殖系腫瘤之首。前列腺癌具有潛伏性長、發(fā)病率高的特點。在我國70歲以上男性人群中，高達25%的人患有前列腺癌。但臨床上前列腺癌早期診斷率低，因而多數(shù)患者失去了早期手術(shù)根治的機會。通過siRNA下調(diào)Notch1基因可以有效抑制人類前列腺癌細(xì)胞的生長。然而如何靶向輸送siRNA進入特定細(xì)胞是臨床應(yīng)用此技術(shù)的主要障礙。最近有研究表明，單鏈抗體介導(dǎo)的靶向輸送系統(tǒng)是高效下調(diào)相應(yīng)基因的有效方法。為了解決RNA干擾技術(shù)在體內(nèi)應(yīng)用缺乏靶向性的難題，我們擬通過抗前列腺癌單鏈抗體的融合基因，并予以優(yōu)化，進行表達、純化后獲得融合蛋白scFv-Fdt-HA2-tp（sFH-tP），構(gòu)建成siRNA靶向輸送系統(tǒng)。利用FITC-siRNA在體內(nèi)外驗證這一系統(tǒng)的有效性；隨后驗證靶向輸送的針對Notch1基因抑制效果最佳的siRNA在體內(nèi)外對前列腺癌細(xì)胞生長的抑制作用。利用這一靶向輸送系統(tǒng)不但能克服siRNA在體內(nèi)輸送效率低下，還避免siRNA大量應(yīng)用時所產(chǎn)生的“脫靶”效應(yīng)、非特異性免疫反應(yīng)等問題，實現(xiàn)對腫瘤生長的高效抑制，為RN... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖12008年世界衛(wèi)生組織關(guān)于全球及美國癌癥的調(diào)查Fig.1Estimatednumbers(thousands)ofnewcancercases(incidence)anddeaths(mortality)

胞漿[78](圖2)。綠膿桿菌外毒素分子轉(zhuǎn)運結(jié)構(gòu)域（280-338氨基酸）的中心功能區(qū)為螺旋結(jié)構(gòu)同時也是主要轉(zhuǎn)運基團[79]。圖2綠膿桿菌外毒素[80]Fig.2 PseudomonasexotoxinA(PE)[80]白喉毒素（diphtheria toxin，DT）是由感染β噬菌體tox基因組的白喉桿菌所產(chǎn)生分子量約為58kDa的外毒素，結(jié)構(gòu)為3個獨立的結(jié)構(gòu)域：具有毒性結(jié)構(gòu)域由N端l-193氨基酸組成，轉(zhuǎn)位結(jié)構(gòu)域由205-375氨基酸組成，細(xì)胞膜受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域由386-535氨基酸組成[81]（圖3）。完整的白喉毒素對細(xì)胞無毒性，白喉毒素與細(xì)胞膜表面的受體結(jié)合形成毒素-受體聚合物并內(nèi)化入細(xì)胞形成內(nèi)吞體，弗林蛋白酶的作用下在內(nèi)吞體中裂解為由二硫鍵相連的兩個亞基，分別為有核糖體依賴的酶活性大小約21kDa的包含毒性結(jié)構(gòu)域

氨基酸組成[81]（圖3）。完整的白喉毒素對細(xì)胞無毒性，白喉毒素與細(xì)胞膜表面的受體結(jié)合形成毒素-受體聚合物并內(nèi)化入細(xì)胞形成內(nèi)吞體，弗林蛋白酶的作用下在內(nèi)吞體中裂解為由二硫鍵相連的兩個亞基，分別為有核糖體依賴的酶活性大小約21kDa的包含毒性結(jié)構(gòu)域，另一個由受體結(jié)合域、轉(zhuǎn)運域組成大小約為37kDa。白喉毒素在

【參考文獻】：
期刊論文
[1]靶向調(diào)控UPRT/5-FU自殺基因系統(tǒng)對前列腺癌細(xì)胞旁觀者效應(yīng)的研究[J]. 趙福軍,李虹,曾浩,魏強,李響.  四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2008(03)



本文編號：3121170