發(fā)布時(shí)間：2017-04-17 00:16

  本文關(guān)鍵詞：Hsa-let-7a及其靶點(diǎn)—IGF1R在復(fù)發(fā)前列腺癌中的表達(dá)差異，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：前列腺癌已成為全球男性人群中發(fā)病率最高的惡性腫瘤。其中根治性前列腺切除術(shù)為早期前列腺癌的治療方法。約有30%的前列腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā),并伴有血清前列腺特異性抗原(PSA)表達(dá)水平升高。術(shù)后復(fù)發(fā)往往是造成前列腺癌患者致死的主要因素。目前一些前列腺特異性抗原已成為復(fù)發(fā)前列腺癌腫瘤標(biāo)記物,但患者往往存在個(gè)體差異,前列腺特異性抗原檢查無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確診斷,因此現(xiàn)階段亟待發(fā)現(xiàn)能夠早期診斷復(fù)發(fā)前列腺癌的新型腫瘤標(biāo)記物。MicroRNA及腫瘤干細(xì)胞相關(guān)研究已有大量報(bào)道。研究表明microRNA是一類內(nèi)生的、長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的小RNA。它可調(diào)節(jié)細(xì)胞生命活動(dòng),并參與生命過(guò)程中一系列的重要進(jìn)程,包括早期發(fā)育、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞死亡、脂肪代謝和細(xì)胞分化,因此在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。腫瘤干細(xì)胞是腫瘤中具有自我更新能力并能產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞,其具有極強(qiáng)的致瘤能力。我們對(duì)68例患前列腺癌后接受根治性前列腺切除術(shù)患者(32例術(shù)后復(fù)發(fā),36例非復(fù)發(fā))進(jìn)行了研究。我們選取研究報(bào)道過(guò)的前列腺癌干細(xì)胞中表達(dá)差異的6個(gè)microRNA(microRNA-143,microRNA-145,microRNA-200a,microRNA-100,mircroRNA-17,microRNA-let-7a)。分別提取前列腺癌組織樣本RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)6個(gè)microRNA的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)hsa-let-7a的表達(dá)水平在術(shù)后復(fù)發(fā)組樣本中顯著降低。經(jīng)查閱,我們發(fā)現(xiàn)hsa-let-7a的靶點(diǎn)是IGF1R基因,并通過(guò)熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了這一結(jié)論。熒光實(shí)時(shí)定量PCR,Western blotting實(shí)驗(yàn)表明在術(shù)后復(fù)發(fā)組樣本中,IGF1R的mRNA和蛋白表達(dá)量較非復(fù)發(fā)組顯著升高,同時(shí)其下游效應(yīng)分子一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)上調(diào),NO和cGMP濃度升高。將攜帶hsa-let-7a質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入前列腺LNCaP細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)外源性hsa-let-7a的過(guò)表達(dá)抑制了IGF1R及iNOS的表達(dá),NO和cGMP濃度隨之降低。MTT比色法和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)hsa-let-7a組細(xì)胞存活率較陰性對(duì)照組和轉(zhuǎn)染hsa-let-7a抑制因子組低,hsa-let-7a在細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡進(jìn)而影響前列腺癌細(xì)胞的增殖。綜上,本研究發(fā)現(xiàn)hsa-let-7a作用于前列腺癌細(xì)胞中的IGF1R基因。Hsa-let-7a-IGF1R-iNOS-NO-cGMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在前列腺癌細(xì)胞增殖增生過(guò)程中起著重要作用。對(duì)hsa-let-7a進(jìn)行更為深入研究可為復(fù)發(fā)前列腺癌提供新型診斷標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：Hsa-let-7a IGF1R 復(fù)發(fā)前列腺癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文縮略詞索引10-11
• 第一章 引言11-14
• 第二章 材料與方法14-18
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 2.1.1 臨床樣本及細(xì)胞選取14
• 2.1.2 主要儀器和試劑14-15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2.2.1 RNA提取15
• 2.2.2 RT-qPCR測(cè)定miRNA的表達(dá)量15-16
• 2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)16
• 2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染16
• 2.2.5 Western blotting檢測(cè)IGF1R的表達(dá)情況16
• 2.2.6 熒光素酶活性測(cè)定16-17
• 2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)分析不同轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡情況17
• 2.2.8 MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的增殖能力17
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法17-18
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-26
• 3.1 病例信息18-19
• 3.2 術(shù)后復(fù)發(fā)組前列腺癌組織樣本中mi RNA表達(dá)情況：19
• 3.3 前列腺癌細(xì)胞中has-let-7a靶基因的確定19-20
• 3.4 前列腺癌組織樣本中IGF1R基因mRNA和蛋白的表達(dá)情況20-22
• 3.5 前列腺癌細(xì)胞中has-let-7a的功能研究22-26
• 第四章 討論26-31
• 第五章 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-39
• 作者簡(jiǎn)介及科研成果39-40
• 致謝40

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本文編號(hào)：312007