發(fā)布時(shí)間：2017-04-16 14:07

  本文關(guān)鍵詞：microRNA-21低表達(dá)慢病毒載休的構(gòu)建及其調(diào)控膀胱癌細(xì)胞有氧糖酵解的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：膀胱癌以移行上皮細(xì)胞癌為多,是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一。其發(fā)病率和死亡率位于泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中的第二位。其中,大多數(shù)(65%)膀胱癌為非肌層浸潤(rùn)型膀胱癌(non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC),其中約有70%的患者可能再次復(fù)發(fā),另外10%~30%的患者可能進(jìn)一步發(fā)展成肌層浸潤(rùn)型膀胱癌。近年來,盡管手術(shù)發(fā)展迅速,但患者的遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)率與生存率并未見明顯提高,其它治療手段包括化療和放療,但均缺乏特異性,且毒副作用明顯。因此,深入研究膀胱癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,將為膀胱癌的靶向治療提供新的思路。microRNAs(miRNAs)是一類內(nèi)源性的非編碼小RNA,由18-25個(gè)核酸片段組成,參與調(diào)節(jié)其靶基因的表達(dá)。成熟miRNA主要通過結(jié)合至靶基因mRNA的3’端非編碼區(qū),抑制靶基因的mRNA翻譯或者引起其降解,從而參與基因轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控。在常氧狀態(tài)下,大部分細(xì)胞通過產(chǎn)能較多的葡萄糖的氧化磷酸化提供能量,此過程被稱為“糖的有氧氧化”。只有當(dāng)細(xì)胞處在乏氧或應(yīng)激狀態(tài)下,才會(huì)在細(xì)胞質(zhì)中通過產(chǎn)能較少的葡萄糖的酵解生成乳酸以提供能量,此過程被稱為“無氧糖酵解”。糖酵解途徑雖然每分子葡萄糖只生成2個(gè)ATP,但速度快,相對(duì)要容易得多。在1924年,由Otto Warburg發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞即使在氧氣充足的情況下,依然優(yōu)先在細(xì)胞質(zhì)中通過糖酵解途徑代謝葡萄糖以提供ATP,這種現(xiàn)象被稱為“有氧糖酵解”,又被稱為“Warburg效應(yīng)”。已有研究顯示,miRNAs能夠通過直接或間接通路參與腫瘤細(xì)胞糖有氧酵解的調(diào)節(jié),但具體機(jī)制還不明確,因此,本研究擬探討miRNAs在調(diào)控腫瘤有氧糖酵解中的作用及其具體機(jī)制。研究表明,miR-21在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著致癌基因的作用,且miR-21在多種腫瘤中的表達(dá)均出現(xiàn)異常增高。本研究首先成功建立了miR-21敲低的慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)膀胱癌T24細(xì)胞系,以此為基礎(chǔ)進(jìn)行進(jìn)一步研究。我們發(fā)現(xiàn),miR-21在膀胱癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常組織,miR-21敲低后T24細(xì)胞的增殖和克隆形成能力降低。鑒于有氧糖酵解在腫瘤中的重要作用,我們檢測(cè)miR-21敲低后對(duì)T24細(xì)胞有氧糖酵解的影響,發(fā)現(xiàn)葡萄糖攝取減少和乳酸生成降低,即有氧糖酵解速率降低,并伴隨著細(xì)胞對(duì)糖酵解抑制劑2-DG更加敏感,同時(shí)糖酵解限速酶己糖激酶的酶活性降低,提示miR-21敲低后削弱了T24細(xì)胞的有氧糖酵解水平。接著我們檢測(cè)了膀胱癌組織中的糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá),發(fā)現(xiàn)其在腫瘤組織中的表達(dá)均高于癌旁正常組織。另外,我們同時(shí)檢測(cè)了T24細(xì)胞中糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá),發(fā)現(xiàn)miR-21敲低后糖酵解關(guān)鍵酶的mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低,進(jìn)一步提示miR-21可能通過影響糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá)參與T24細(xì)胞有氧糖酵解的調(diào)節(jié)。隨后我們發(fā)現(xiàn)了miR-21敲低后,miR-21的靶基因PTEN表達(dá)升高,同時(shí)PI3K/Akt/m TOR通路被抑制,p-Akt、p-4EBP1、p-S6K表達(dá)降低。綜上我們得出結(jié)論:miR-21參與了膀胱癌T24細(xì)胞有氧糖酵解的調(diào)控;miR-21可能通過調(diào)控T24細(xì)胞有氧糖酵解參與腫瘤增殖的調(diào)節(jié);miR-21對(duì)有氧糖酵解的調(diào)控可能是通過PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路來實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：miR-21 膀胱癌 有氧糖酵解(Warburg效應(yīng)) AKT
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-13
• 材料與方法13-31
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法31-32
• 結(jié)果32-44
• 討論44-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 綜述57-76
• 參考文獻(xiàn)65-76
• 附錄76-78
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況78-80
• 致謝80

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本文編號(hào)：310971