目的:長鏈非編碼RNA（Long noncoding RNAs,lncRNAs）已經(jīng)被證實可以通過調(diào)控其靶基因來調(diào)節(jié)前列腺癌（PCa）的發(fā)生發(fā)展。然而,lncRNA TUG1如何調(diào)控前列腺癌細胞的生物學(xué)行為尚不明確。本文將研究TUG1對前列腺癌細胞生物學(xué)行為的影響及其潛在分子機制。方法:培養(yǎng)人前列腺癌細胞系和非致瘤性人前列腺上皮細胞系,提取其總RNA,通過逆轉(zhuǎn)錄-定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）分析TUG1在各細胞株中的表達水平。應(yīng)用小干擾RNA（siRNA）處理前列腺癌細胞,并按陰性對照組（NC）和敲低組（siTUG1）進行分組。通過傷口愈合實驗、Transwell遷移/侵襲實驗和CCK8法來檢測敲低TUG1對前列腺癌細胞的遷移、侵襲和增殖能力的影響。生物信息學(xué)分析方法預(yù)測TUG1調(diào)控的下游靶基因。Western blotting實驗分析Nrf2及其下游基因的表達水平變化,利用Oltipraz（Nrf2的一種特異性激動劑）進行“拯救試驗”。結(jié)果:與非致瘤性人前列腺上皮細胞相比,前列腺癌細胞中TUG1表達明顯上調(diào)。使用生物信息學(xué)工具（LncTar Web Server）來預(yù)測TUG1... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

qRT-PCR顯示TUG1在不同細胞中的表達

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文17圖2.Transwell遷移、侵襲實驗，傷口愈合實驗檢測NC組、siTUG1組、siTUG1與Oltipraz共培養(yǎng)組細胞的遷移、侵襲能力變化。所有試驗至少進行3次，數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示。(*:Si-TUG1vsSi-TUG1+Oltipraz,**P<0.01,*P<0.05;#:Si-NCvsSi-TUG1,##<0.01,#<0.05)Fig.2.TheinvasiveandmigratoryabilitiesofPC3cellswithdifferenttreatmentswereevaluatedbyTranswellmigration/invasionassayandquantificationofwound-healingability.Alltestswereconductedatleast3times.Dataareexpressedasmean±SD.(*:Si-TUG1vsSi-TUG1+Oltipraz,**P<0.01,*P<0.05;#:Si-NCvsSi-TUG1,##<0.01,#<0.05)2.3TUG1在前列腺癌細胞系中的表達與Nrf2呈正相關(guān)為了進一步探討TUG1在前列腺癌中的作用機制，我們在TCGAPCaRNA-Seq數(shù)據(jù)庫中進行了共表達分析(圖3A和B)，發(fā)現(xiàn)了TUG1與Nrf2呈顯著正相關(guān)(r=0.26,P=4.63E-09,n=497，圖3C)。另一方面，我們使用生物信息學(xué)工具LncTar發(fā)現(xiàn)Nrf2通過結(jié)合核苷酸序列被預(yù)測為TUG1的靶點[33](表1)。此外，我們證實了在敲低TUG1組的PC3細胞中Nrf2的mRNA表達量也隨之下調(diào)(圖3D)。這些數(shù)據(jù)表明TUG1的表達與前列腺癌細胞中Nrf2的表達呈正相關(guān)。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文18圖3(A和B)前50位分別與TUG1呈顯著正相關(guān)和負相關(guān)的基因。(C)在TCGAPCaRNA-Seq數(shù)據(jù)庫中，Nrf2表達與TUG1表達呈正相關(guān)。(D)qRT-PCR檢測在PC3細胞株中NC組與轉(zhuǎn)染siRNA-TUG1組Nrf2表達量變化。所有試驗至少進行了3次。數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示;**P<0.01Fig.3.(AandB)Thetop50genesthatsignificantlypositivelyandnegativelycorrelatedwithTUG1,respectively.(C)Nrf2expressionwaspositivelyassociatedwithTUG1expressionintheTCGAPCaRNA-Seqdataset.(D)Nrf2expressionlevelsinthePC3celllinetransfectedwithsi-RNA#2againstTUG1orsi-NCweredetectedbyqRT-PCR.Alltestswereundertakenatleast3times.Dataareexpressedasmean±SD;**P<0.01.表1Nrf2是lncRNATUG1的預(yù)測RNA靶點dG表示兩條RNA分子之間的自由結(jié)合能力。ndG反應(yīng)兩條RNA內(nèi)部堿基對的相對穩(wěn)定性Table1Nrf2asapredictingRNAtargetoflncRNATUG1.DeltaG(dG)representstheapproximatebindingfreeenergybetweentwoRNAmolecules.Normalizedfreeenergy(ndG)reflectstherelativestabilityofinternalbasepairsinthepairedRNAs.QueryLengthTargetLengthdGndGStartPositionEndPositionStartPositionTargetEndPositionTargetTUG17542NRF2298887.890.13170922802988


本文編號：3102722