目的:明確MCM3基因在膀胱癌組織、癌旁正常膀胱組織及在膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,分析MCM3基因在正常與癌組織中的表達(dá)差異,闡明其表達(dá)水平與膀胱癌患者臨床病理特征之間的相關(guān)性和臨床意義,同時(shí)通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)MCM3在膀胱癌細(xì)胞增殖和侵襲中發(fā)揮的作用。方法:利用膀胱癌組織和癌旁正常膀胱組織標(biāo)本及膀胱癌細(xì)胞系5637和T24,通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)膀胱癌組織和癌旁正常膀胱組織MCM3 mRNA的表達(dá)水平。同時(shí)使用實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blot檢測(cè)MCM3在膀胱癌細(xì)胞系5637和T24中mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對(duì)膀胱癌細(xì)胞系進(jìn)行MCM3特異的siRNA轉(zhuǎn)染,利用CCK8,Transwell等實(shí)驗(yàn)對(duì)MCM3在膀胱癌細(xì)胞增殖、侵襲中的作用進(jìn)行研究。結(jié)果:在臨床標(biāo)本中的檢測(cè)MCM3的表達(dá)水平,膀胱癌組織中表達(dá)顯著高于癌旁正常組織中的表達(dá),且與膀胱癌浸潤(rùn)性、臨床分期、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移正相關(guān)。在細(xì)胞水平上,MCM3表達(dá)水平隨著膀胱癌細(xì)胞惡性程度的增高而增高。特異性的siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后進(jìn)行RNA與蛋白質(zhì)檢測(cè)證實(shí),MCM3被有效敲除。CCK8實(shí)驗(yàn)顯示,MCM3敲除組與對(duì)照組相... 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：40 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MCM3mRNA在膀胱癌組織和癌旁正常膀胱組織中的表達(dá)情況

CM3 mRNA 在膀胱癌細(xì)胞系 5637, T24 和正常膀胱細(xì)胞系 SV-HUC***代表 p<0.01。estern Blot 檢測(cè) SV-HUC-1、T24、5637 三種膀胱癌細(xì)胞系源性表達(dá)水平3 種細(xì)胞中 MCM3 在蛋白水平的內(nèi)源性表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示（CM3 蛋白在 SV 膀胱永生化細(xì)胞、T24、5637 兩種膀胱癌細(xì)胞系M3 的蛋白水平在 T24（0.37±0.02, n=5）、5637（0.33±0.01, n=5的表達(dá)量高于 SV（0.16±0.03, n=5）膀胱永生化細(xì)胞系。

圖 2. MCM3 mRNA 在膀胱癌細(xì)胞系 5637, T24 和正常膀胱細(xì)胞系 SV-HUC-1 中的表達(dá)情況。***代表 p<0.01。3.3、Western Blot 檢測(cè) SV-HUC-1、T24、5637 三種膀胱癌細(xì)胞系的 MCM3蛋白內(nèi)源性表達(dá)水平對(duì) 3 種細(xì)胞中 MCM3 在蛋白水平的內(nèi)源性表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示（圖 3a 和3b）：MCM3 蛋白在 SV 膀胱永生化細(xì)胞、T24、5637 兩種膀胱癌細(xì)胞系內(nèi)均能表達(dá)，MCM3 的蛋白水平在 T24（0.37±0.02, n=5）、5637（0.33±0.01, n=5）膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)量高于 SV（0.16±0.03, n=5）膀胱永生化細(xì)胞系。


本文編號(hào)：3092307