目的：通過觀察維生素D受體激動劑活性維生素D（1,25-（OH）-2D3, VitD3）及其類似物埃羅骨化醇（BXL-628）對高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細胞（HK-2） RhoA活化的影響,研究其對HK-2細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化及細胞外基質(zhì)的作用,并探討其可能機制。方法：體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞HK-2,（1）使用高糖培基（30mmol/L）刺激HK-2細胞。使用Western Blot觀察0min、30min、1h、2h、4h、8h、12h活性RhoA蛋白的表達情況；（2）分別使用Western Blot及RealTime PCR觀察Oh、12h、24h、48h、72h時α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和E鈣粘素（E-cadherin）蛋白及mRNA的表達；（3）將HK-2細胞設(shè)正常對照組（葡萄糖5.6mmol/mL）高糖（葡萄糖30mmol/mL）組、VitD3組（高糖+VitD3,10-7mol/L）組、BXL-628組（高糖+BXL-628,10-5nmol/L）,使用RealTime PCR、 Western Blot方法觀察各組細胞48h α-SMA、E-cadherin蛋白及mRN... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人近端'！^〗、管上皮細胞RNA球脂糖凝膠電泳

min、30min、1 h、2 h、4h、8 h、12 h)刺激HK-2細胞，并使用相同濃度的甘露醇培基做對照試驗。Western Blot結(jié)果如圖3-2所示，在高糖刺激下HK-2細胞在30 min之內(nèi)即出現(xiàn)活化，活性RhoA蛋白表達增加，2小時活化達到高峰，較0 min增加1.94 土 0.22倍，1 h至8 h間均維持在較高水平。12 h點仍高于Omin,1 h、2 h、4 h、8h點對比0 min P值均< 0.05，12 h點P值> 0.05。甘露醇對照組提示，等濃度甘露醇對HK-2細胞RhoA活化無明顯影響

12 h點P值> 0.05。甘露醇對照組提示，等濃度甘露醇對HK-2細胞RhoA活化無明顯影響，P值>0.05。如圖3-3所示，免疫熒光定性實驗結(jié)果同樣提示在高糖刺激2h后RhoA出現(xiàn)明顯活化，對比正常對照組，高糖組綠色榮光表達明顯增強，且焚光表達多集中于細胞膜處。15

【參考文獻】：
期刊論文
[1]維生素D受體基因BsmI多態(tài)性與2型糖尿病腎病的關(guān)系[J]. 易斌,張浩,趙延,王建文,蔡旭,劉妍,孫劍.  中華腎臟病雜志. 2012 (04)
[2]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）及其分子機制[J]. 姚嬋,來茂德.  國際遺傳學(xué)雜志. 2006(04)



本文編號：3084348