目的:全基因組關(guān)聯(lián)分析顯示轉(zhuǎn)錄因子Kruppel-like factor 14（KLF14）與2型糖尿病及脂質(zhì)代謝有關(guān),也有研究顯示KLF14敲除的小鼠可引起中心體擴(kuò)增、染色體非整倍性和自發(fā)性腫瘤的發(fā)生,然而其在腎臟中的作用尚不清楚,因此我們建立了KLF14基因敲除（KLF14-/-）C57BL/6小鼠模型,擬以此來研究轉(zhuǎn)錄因子KLF14在腎臟的功能及在腎損傷中的作用。方法和結(jié)果:利用新型基因組編輯技術(shù)-轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)因子核酸酶（TALEN）技術(shù)建立KLF14基因敲除小鼠模型。血生化分析顯示,與野生鼠相比,KLF14基因敲除鼠的高密度脂蛋白膽固醇有顯著性降低。通過P AS染色觀察野生鼠與KLF14基因敲除鼠腎小球的病理改變,用PCNA免疫組化染色判斷腎小球細(xì)胞增殖情況。結(jié)果顯示,與野生組相比,KLF14基因敲除鼠腎小球可見到較重的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）聚集和系膜細(xì)胞增生;PCNA染色結(jié)果顯示KLF14基因敲除鼠腎小球細(xì)胞的PCNA陽性率明顯高于野生組。通過高通量測序技術(shù)RNA-seq技術(shù)比較了野生鼠及KLF14基因敲除鼠腎臟中mRNA表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)兩者有38個(gè)差異表達(dá)基因。在KLF14基因... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．２測序鑒定小鼠ＫＬＦ１４基因敲除Ａ：野生鼠，敲除鼠Ａ和敲除鼠Ｂ的ＤＮＡ序列

ＫＬＦ１４基因敲除鼠的基本特征改變???ＫＬＦ１４基因敲除鼠的體重及血生化改變??了明確ＫＬＦ１４基因的缺失對小鼠的影響，在小鼠處死前分別稱量體重并取ＫＬＦ１４基因敲除鼠的血液和２４ｈ尿液來比較兩組整體差異．結(jié)果顯示，體重，膽固醇，低密度脂蛋白，甘油三酯和血糖水平以及腎功能指標(biāo)在兩組之間并差異，ＫＬＦ１４基因敲除組小鼠血清的高密度脂蛋白水平要明顯低于ＫＬＦ１４＋／＋差異有顯著性意義（表１－１）。??

?Ｋ．Ｖ??ｈ?：?ｖ?如??圖１．５腎臟組織的免疫組化檢測ＰＣＮＡ的變化，以判斷腎小球細(xì)胞增殖比率。（Ａ）腎小球的??免疫組化檢測ＰＣＮＡ的差異（Ｂ）ＫＬＦ１４基因敲除組（ＫＬＦ１４－／－）的ＰＣＮＡ陽性率比野生組??（ＫＬＦ１４＋／＋）高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。每組小鼠取７只，每個(gè)小鼠取２０個(gè)腎小球進(jìn)行??計(jì)數(shù)。所有數(shù)值采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示．與野生組（ＫＬＦ１４＋／＋）比較，＊＊Ｐ＜０．０１。??２９??


本文編號：3062301