目的:蛋白尿不僅僅是腎小球疾病腎損傷的結(jié)果,更是加重腎小管-間質(zhì)損傷的一種重要原因。前期研究已證實(shí)自噬激活減輕了尿蛋白誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷,然而自噬激活減輕尿蛋白所致腎小管上皮細(xì)胞損傷而發(fā)揮保護(hù)作用的具體機(jī)制尚未完全清楚。近年來線粒體功能異常已成為研究腎小管上皮細(xì)胞損傷的熱點(diǎn)問題。適時(shí)地清除功能異常的線粒體,對于維持腎小管上皮細(xì)胞正常生長與代謝具有非常重要的意義。Pink1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬便是清除線粒體的經(jīng)典途徑之一。由此我們推測尿蛋白所誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷是否是通過受損的線粒體激活了Pink1/Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬,清除了受損的線粒體,從而減輕了尿蛋白超負(fù)荷所致腎小管上皮細(xì)胞損傷的呢。本研究通過選取尿蛋白的主要成分白蛋白超負(fù)荷處理腎小管上皮細(xì)胞,并結(jié)合基因沉默技術(shù)敲除PARK2基因,檢測腎小管上皮細(xì)胞凋亡水平、細(xì)胞內(nèi)線粒體功能、自噬水平以及線粒體自噬強(qiáng)度的變化,研究尿蛋白的主要成分白蛋白誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞線粒體受損是否通過Pink1/Parkin信號通路介導(dǎo)了腎小管上皮細(xì)胞線粒體自噬激活。方法:（1）研究對象:人近端腎小管上皮細(xì)胞株HK-2細(xì)胞（2）模... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
1.對象和方法
    1.1 腎小管上皮細(xì)胞培養(yǎng)及分組
    1.2 總蛋白提取和總蛋白濃度測定
    1.3 Western blot蛋白免疫印跡技術(shù)
    1.4 免疫熒光染色技術(shù)
    1.5 透射電子顯微鏡
    1.6 JC-1線粒體膜電位檢測
    1.7 Mito-Tracker Green線粒體綠色熒光探針和Lyso-Tracker Red溶酶體紅色熒光探針
    1.8 SiRNA的轉(zhuǎn)染技術(shù)
    1.9 TUNEL 檢測細(xì)胞凋亡
    1.10 統(tǒng)計(jì)與方法
2.結(jié)果
    2.1 白蛋白超負(fù)荷可加重腎小管上皮細(xì)胞凋亡
    2.2 白蛋白超負(fù)荷導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)線粒體超微結(jié)構(gòu)異常,并有自噬體的形成
    2.3 白蛋白超負(fù)荷導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞中線粒體的膜電位下降
    2.4 白蛋白超負(fù)荷導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C釋放
    2.5 白蛋白超負(fù)荷對腎小管上皮細(xì)胞中自噬水平的影響及Pink1、Parkin蛋白表達(dá)的影響
    2.6 敲低PARK2后,腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)Parkin蛋白表達(dá)以及自噬和線粒體自噬水平變化
3 討論
    3.1 尿蛋白中的主要成份（白蛋白）誘導(dǎo)了腎小管上皮細(xì)胞凋亡及線粒體損傷
    3.2 白蛋白超負(fù)荷損傷的線粒體誘導(dǎo)了腎小管上皮細(xì)胞自噬激活,且為線粒體自噬
    3.3 白蛋白超負(fù)荷損傷的線粒體通過Pink/Parkin通路激活了線粒體自噬
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 自噬在尿蛋白所致腎臟固有細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]eNOS參與鐵過載誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體損傷[J]. 何歡,張澤宇,劉丹,廖章萍,尹東,何明.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2017(10)
[2]蛋白尿加速慢性腎臟病進(jìn)展的分子機(jī)制[J]. 李丹,丁潔.  北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(05)



本文編號：3031326