[研究目的]探索IgGFc區(qū)域Asn297位點(diǎn)糖基化異常引發(fā)免疫性睪丸炎的分子機(jī)制,以及曲細(xì)精管中白細(xì)胞產(chǎn)生過多的ROS抑制抗氧化劑,損傷精原細(xì)胞DNA和精子質(zhì)膜的機(jī)制。[研究方法]本研究收集127例免疫性睪丸炎患者的血清樣本,單分子實(shí)時(shí)（Single-molecule real-time,SMRT）環(huán)狀一致測序（Circular consensus sequencing,CCS）用于 IgG 的Fc區(qū)域Asn297位點(diǎn)蛋白結(jié)構(gòu)序列數(shù)據(jù)分析,求出蛋白質(zhì)片段的氨基酸出現(xiàn)頻率的香農(nóng)熵值,獲得突變位點(diǎn),Sanger測序驗(yàn)證Asn297基因突變位點(diǎn)的正確性。熒光酶標(biāo)儀檢測精液ROS的含量,并結(jié)合生化檢查、組織病理和免疫組化檢查結(jié)果,綜合分析并闡述免疫性睪丸炎的發(fā)病機(jī)制。[研究結(jié)果]患者血清IgG濃度為2231.4±291.5mg/dl,高于正常范圍80～1400mg/dl,而38例對照組為386.3±182.6mg/dl。患者血清50%溶血單位補(bǔ)體（CH50）濃度為128.32±61.51 U/ml,顯著高于正常值（23～46 U/ml）,而對照組相應(yīng)濃度為31.43±8.37 U/ml�；颊�... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖－１濕轉(zhuǎn)“三明治”裝配示意圖??ＤｔＳ？°＇?？??酶＿???

檢驗(yàn)顯示試驗(yàn)組與對照組的平均值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ＜０．０５）。免疫組織??化學(xué)染色顯示大量的ＩｇＧ＋淋巴漿細(xì)胞浸潤在睪丸、附睪和鞘膜組織內(nèi)。典型病例的??病理組織和免疫組化染色結(jié)果如圖２所示。??Ｈ嗎?—??＇?＇４??酬二：??；；？??圖２．睪丸組織典型的病理表現(xiàn)??ａ．鞘膜組織內(nèi)免疫復(fù)合物沉積和大量淋巴漿細(xì)胞浸潤。小血管壁增厚，血管腔內(nèi)有??大量中性粒細(xì)胞。??ｂ．睪丸組織間質(zhì)內(nèi)細(xì)胞成分增多，密集的淋巴漿細(xì)胞浸潤（白箭頭示）和細(xì)紋狀纖??維化，ＨＥ染色，４００倍；??３０??

我們進(jìn)行了?ＩｇＧＶＨ?Ｆｃ區(qū)域第６號(hào)外顯子（３００４５０?ｂｐ）?Ｐ?ＣＲ靶向擴(kuò)增的ｃＤＮＡ??文庫，利用ＩｇＧ的Ｆｃ區(qū)域特異性引物３瑞（５ＬＣＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴＧＴＧＣＴＳＴＣＡ－３０，??分析ＰＣＲ產(chǎn)物的Ｓａｎｇｅｒ測序（圖４）。發(fā)現(xiàn)９６例患者存在Ａｓｎ２９７位點(diǎn)的確切突變。??有３６例患者在Ａｓｎ２９７位點(diǎn)（ＣＡＣ）突變?yōu)椋ǎ粒粒茫�。第６�?hào)外顯子８９１密碼子的??突變是Ａ到Ｃ的替換，這導(dǎo)致了這種氨基酸從天冬酰胺轉(zhuǎn)化為其他的氨基酸。３１??例患者第６號(hào)外顯子的８９２密碼子存在病理性突變，即天冬酰胺（ＡＡＣ）轉(zhuǎn)變?yōu)榻z??氨酸（ＡＧＣ）。２９例ＩｇＧ基因插入或刪除的移碼突變。３１例沒有證據(jù)表明在Ａｓｎ２９７??基因突變，他們可能有其他位點(diǎn)基因突變，尚未檢出。與此相反，對３８名健康男??性的ＩｇＧ基因沒有檢測到突變。根據(jù)ＧｅｎＢａｎｋ中公開發(fā)表的結(jié)果，Ａｓｎ２９７位點(diǎn)的??天冬酰胺突變發(fā)生在健康人中是非常低的。??Ａ?Ｂ??Ｎ＿ａｌ?—ａｌ／＼Ａ?八―—＇／Ｖ’ａａＡ??ｃｃａｇａａＥｃａｇｔｇ?ｃ?ｃＩｇ＂＂?ｃ?ｃ＂?ｇｔｇ??８９１ａ＞〇ａＡ＾ａ＾ｍｉ?—贏Ａ?ｈ必??■?？■■■■?＿■?■■■■■??ＣＣＡＧＣｋＣＣＡＧＴＧ?Ｃ?Ｃ?ｋ?Ｇ?Ａ?Ｇ?Ｃ?Ｃ?Ａ?Ｇ?Ｔ?Ｇ??圖４．?ＩｇＧ基因序列Ａｓｎ２９７突變。（Ａ）測序結(jié)果表明，在基因第６號(hào)外顯子８９１位??密碼子Ａ突變?yōu)椋?


本文編號(hào)：2981918