目的研究PHD2基因在前列腺癌PC3細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成及細(xì)胞增殖、遷移、侵襲中的作用方法1.前列腺癌PC3細(xì)胞株體外培養(yǎng),設(shè)計(jì)4條PHD2shRNA序列,包裝后轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞,利用Western Blot及RT-PCR檢測沉默效率,選出沉默效果最好的shRNA為實(shí)驗(yàn)組。2.實(shí)驗(yàn)分為PC3組、PC3+shRNA-NC組和PC3+PHD2shRNA組,利用Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染后各組PC-3細(xì)胞中PHD2及HIF-1α、EphA2蛋白表達(dá)變化情況。3.各組細(xì)胞進(jìn)行體外三維培養(yǎng),顯微鏡下觀察各組PC3細(xì)胞中血管生成擬態(tài)形成數(shù)目的變化情況。4.利用MTT增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn),檢測各組PC3細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的變化情況。結(jié)果1.Western Blot及RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:四組shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前列腺癌PC3細(xì)胞后,PC3細(xì)胞中PHD2 mRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平均明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。獲得實(shí)驗(yàn)組PHD2shRNA,沉默效率達(dá)80%以上。2.Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染48h后,較空白組及陰性... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pGPU6/GFP/Neo表達(dá)質(zhì)粒圖譜

4.2 Real time-PCR 實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果4.2.1 實(shí)驗(yàn)分組NO 樣本編號 NO 樣本編號1 A、PC3 4 D、shRNA 質(zhì)粒 22 B、NC 5 E、shRNA 質(zhì)粒 33 C、shRNA 質(zhì)粒 1 6 F、shRNA 質(zhì)粒 44.2.2 擴(kuò)增曲線：結(jié)果描述及分析：結(jié)果顯示PHD2的擴(kuò)增曲線具有正常擴(kuò)增曲線的4個(gè)特征，而陰性對照組（水）無明顯熒光信號顯示，提示 RT-PCR 程序運(yùn)作正常，PHD2基因得到有效擴(kuò)增。（見圖 4.2、圖 4.3）

4.2.2 擴(kuò)增曲線：結(jié)果描述及分析：結(jié)果顯示PHD2的擴(kuò)增曲線具有正常擴(kuò)增曲線的4個(gè)特征，而陰性對照組（水）無明顯熒光信號顯示，提示 RT-PCR 程序運(yùn)作正常，PHD2基因得到有效擴(kuò)增。（見圖 4.2、圖 4.3）圖 4.2 PHD2 的擴(kuò)增曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]前列腺癌組織中血管生成擬態(tài)形成的分子通路研究進(jìn)展[J]. 李俊君,常德貴,董良,陽方,俞旭君.  中國性科學(xué). 2017(05)
[2]沉默Epha2對前列腺癌PC3細(xì)胞生物學(xué)性狀與血管生成擬態(tài)的影響[J]. 曹陽,李清.  實(shí)用癌癥雜志. 2016(04)
[3]低氧應(yīng)激因子PHD2與血管新生相關(guān)疾病[J]. 賈慧珍,KASIM Vivi,徐志玲,楊力,吳壽榮.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2014(02)



本文編號：2981186