背景腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）是終末期腎臟疾病腎臟替代治療方式之一。但是長期暴露于非生理性的腹透液可引起腹膜組織發(fā)生纖維化（peritoneal fibrosis,PF）,最終導致超濾衰竭。腹透液中所含的高濃度葡萄糖是腹膜病變的重要始動和促進因素。高糖環(huán)境下,腹膜間皮細胞表達多種細胞因子及趨化因子,在腹膜炎癥及纖維化過程中有重要作用。高遷移率蛋白B1（high mobility group B1,HMGB1）是一種廣泛存在于真核細胞的核內因子,同時也是一種重要的炎癥介質,與腹膜炎癥發(fā)生密切相關。目的本課題重點探究內源性的HMGB1在高糖介導的腹膜間皮細胞炎癥反應中的地位,明確HMGB1參與腹膜間皮細胞炎癥因子表達的可能機制。方法使用人腹膜間皮細胞系HMrSV5作為研究對象。通過體外細胞培養(yǎng),觀察高糖環(huán)境下細胞內HMGB1的定位變化;檢測細胞在高糖以及重組HMGB1蛋白刺激條件下細胞炎癥因子表達變化,并使用小干擾RNA沉默間皮細胞內HMGB1,檢測HMGB1沉默后細胞在高糖環(huán)境下炎癥因子的表達變化;最后,檢測HMGB1刺激體系中腹膜間皮細胞內MAPK信號通路... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

光鏡下間皮細胞的形態(tài)學特點，細胞呈集落樣生長，融合后呈鋪路石狀

1.3.2 高濃度葡萄糖可導致腹膜間皮細胞內 HMGB1 表達減少細胞內的 HMGB1 通常完全位于細胞核內，但在某些刺激因素的作用下，細胞核內的 HMGB1 可從細胞核內轉移出來。為觀察高糖刺激條件下腹膜間皮細胞內HMGB1 的表達變化，我們使用不同濃度（84mM、138mM、236mM）的高葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng)間皮細胞。高糖刺激 48 小時后，用 Western Blot 檢測細胞內 HMGB1 的表達。如圖 3 所示，隨著葡萄糖濃度的增加，細胞內 HMGB1 的表達逐漸減少。其中葡萄糖濃度為 236mM 的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的間皮細胞胞內 HMGB1 含量下降最明顯，因此選取 236mM 的培養(yǎng)基培養(yǎng)不同時間，以觀察胞內 HMGB1 的含量的時間變化。結果顯示，隨著培養(yǎng)時間的增加，間皮細胞內 HMGB1 水平隨之遞減（圖 3）。同時，如此高濃度的葡萄糖必然伴隨著高滲透壓，為驗證高糖刺激條件下腹膜間皮圖 2. HMrSV5 細胞同時表達上皮細胞的標志蛋白 Cytokeratin-18, E-cadherin 以及間質細胞的標志蛋白 Vimentin

1.3.3 高濃度葡萄糖刺激下腹膜間皮細胞核內 HMGB1 含量減少而細胞質內HMGB1 表達增加為進一步觀察高糖對腹膜間皮細胞 HMGB1 的表達的影響，我們進行免疫熒實驗對 HMGB1 的細胞定位進行直接的觀察。之前的實驗發(fā)現(xiàn)，細胞內的 HMGB1葡萄糖濃度為 236mM 的高糖培養(yǎng)基中 48 小時 HMGB1 含量有明顯下降，因此選該濃度及時間點對細胞內 HMGB1 的定位進行免疫熒光染色，同濃度的甘露醇溶作為滲透壓對照。結果發(fā)現(xiàn)，高糖組的腹膜間皮細胞核內 HMGB1 熒光密度明顯降，伴隨著細胞質內 HMGB1 的熒光密度增加，而滲透壓對照組和空白對照組圖 3. 不同濃度的高糖培養(yǎng)基（84mM、138mM、236mM）培養(yǎng)細胞 48 小時后，細胞內 HM達下降，且呈濃度依賴性（上）；腹膜間皮細胞在含葡萄糖 236mM 的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng) 06h、12h、24h、48h，細胞內 HMGB1 含量隨培養(yǎng)時間的延長而下降（中）；含 236mM 的葡培養(yǎng)細胞 48h，同濃度的甘露醇作為滲透壓對照，高濃度的甘露醇不會引起細胞內 HM表達下降（下）


本文編號：2971137