目的:采用體外培養(yǎng)細胞的方法,觀察中藥復(fù)方腎纖康對轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）刺激大鼠腎小管上皮細胞（NRK-52E）轉(zhuǎn)分化的作用,從細胞分子水平探討腎纖康對腎間質(zhì)纖維化的作用及其機制。方法:采用腎纖康及鹽酸貝那普利片給大鼠灌胃,每天分灌2次,持續(xù)5天。5天后大鼠腹主動脈采血,分離血清,即得相應(yīng)藥物含藥血清。體外培養(yǎng)NRK-52E細胞,培養(yǎng)基為含有10%胎牛血清的DMEM/High-glouse培養(yǎng)基。將NRK-52E細胞分為6組:正常對照組（A組,10%正常大鼠血清）、模型組（B組）、低劑量組（C組,2.5%腎纖康含藥血清）、中劑量組（D組,5%腎纖康含藥血清）、高劑量組（E組,10%腎纖康含藥血清）、貝那普利組（F組,10%貝那普利含藥血清）。后5組均用10ng/ml的TGF-β1誘導(dǎo)刺激,經(jīng)藥物干預(yù)細胞72h后,觀察藥物對NRK-52E細胞形態(tài)的影響,采用免疫熒光技術(shù)檢測α-SMA、Smad3、Smad7蛋白的表達情況,Real-time PCR檢測α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA的表達水平... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組NRK-52E細胞的形態(tài)變化（x200）

d 組 e 組 f 組圖 1 各組 NRK-52E 細胞的形態(tài)變化（x200）Picture 1 Morphological changes of NRK-52E cells in every group（x200）表 2 各組 NRK-52E 細胞增殖的情況Table 2 Proliferation of NRK-52E cells in every group分組 OD 值（n=5， x±s） 細胞存活率（%）a 組 1.0926±0.0941 100b 組 1.1684±0.0679 * 106.94c 組 1.1426±0.0950 # 104.58d 組 1.0928±0.0535 # 100.02e 組 1.0862±0.0464 # 99.41f 組 1.1824±0.0436 # 108.22

2、腎纖康含藥血清對 TGF-β1 誘導(dǎo)的 NRK-52E 細胞一般形態(tài)的影響正常的 NRK-52E 細胞（A 組）生長良好，各細胞之間連接緊密，排列成多邊形或者卵圓形，像“鋪路石”一樣平鋪在培養(yǎng)皿上；單純TGF-β1 刺激 72h 后細胞（B 組）形態(tài)出現(xiàn)明顯改變，大部分細胞失去其原有形態(tài)，拉長呈梭形，細胞之間排列欠緊密；腎纖康含藥血清各劑量組（C 組、D 組、E 組）細胞形態(tài)發(fā)生變化，但變化程度均較B 組減輕，且隨著劑量的增加，細胞形態(tài)變化逐漸接近于正常NRK-52E 細胞；F 組細胞很少部分呈梭形，大部分為仍為“鋪路石”狀，與 E 組細胞變化大致相同。見圖 3。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]益腎化瘀方含藥血清對NRK52E轉(zhuǎn)分化過程中TGF-β1、BMP-7表達的影響[J]. 汪青,肖東,呂雁,高志卿,張琳琪.  中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志. 2016(01)
[2]益腎化瘀方含藥血清對NRK52E細胞轉(zhuǎn)分化過程中p-Smad2/3、Smad7表達的影響[J]. 王海亮,趙威,高志卿,邢海燕,張琳琪.  中華中醫(yī)藥雜志. 2015(12)
[3]貝那普利聯(lián)合低分子肝素對大鼠腎纖維化的作用研究[J]. 盧濤,朱春玲.  貴州醫(yī)藥. 2015(10)
[4]水蛭素對腎病綜合征患者凝血酶激活的纖溶抑制物的影響及療效觀察[J]. 徐海燕,陳學(xué)勛,劉蒙蒙,郭民.  中成藥. 2015(04)
[5]糖腎康中藥復(fù)方含藥血清對高糖環(huán)境下RMCs的增殖及TGF-β1/Smad2/3信號通路的影響[J]. 婁凱,何永,魏靜,韓文霞,劉丹丹,宋玉文,姜秀云,于春曉,高聆,管慶波.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2015(01)
[6]扶腎降濁方含藥血清對腎小管間質(zhì)損害大鼠成纖維細胞TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J]. 李春雨,蘇瑋蓮,魏曉露,李國霞.  中國病理生理雜志. 2014(11)
[7]蟲草素調(diào)控eIF2α/TGF-β/Smad信號通路改善腎間質(zhì)纖維化的機制[J]. 顧劉寶,卞茸文,涂玥,胡浩,萬毅剛,孫偉.  中國中藥雜志. 2014(21)
[8]糖耐康對TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細胞Smads通路的影響[J]. 楊麗霞,舒暢,吳麗麗,孫文,劉銅華.  中國實驗方劑學(xué)雜志. 2014(20)
[9]扶腎泄?jié)岱▽S持性血液透析患者微炎癥狀態(tài)的影響[J]. 張瓊,胡瓊丹,李小軍,陳定國,梁穎蘭,許艷文.  瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2013(05)
[10]TGF-β、Smad信號通路蛋白及α-SMA在糖尿病腎病患者腎組織中的表達和意義[J]. 房勃龍,韓鴻玲,張鵬,崔瑾.  天津醫(yī)藥. 2013(11)



本文編號：2933202