目的:急性腎損傷是目前已被公認的一種常見的臨床綜合征。Nrf2是在氧化應激水平上維持細胞的重要的調(diào)節(jié)因子,正常細胞通過其介導的抗氧化反應體系抵抗外源性和內(nèi)源性氧化應激,從而提高細胞的抗氧化功能。普遍認為,氧化應激導致了AKI的發(fā)生,目前已經(jīng)有研究證明Nrf2在腎臟損傷中具有保護作用。所以本實驗研究的目的是探討Nrf2在葉酸誘導的急性腎損傷中的作用機制。從Nrf2的氧化應激,炎癥水平,凋亡,鐵死亡和葉酸代謝等通路入手,嘗試為AKI研究提供新線索。研究方法:本研究以Nrf2全身敲除(Nrf2~(-/-))小鼠和C57BL/6(Nrf2~(+/+))小鼠為研究對象,實驗組靜脈注射100mg/kg劑量的葉酸,對照組注射相同劑量的NaHCO_3,誘導小鼠發(fā)生急性腎損傷。48小時后收取小鼠腎組織,一部分做石蠟切片,病理染色PAS、HE、TUNEL,另一部分提取蛋白以及RNA行分子生物學檢查,包括:焦亡蛋白caspase1行Western blot檢測,相關基因Nqo1,Gclc,Gclm,IL6,Tnfα,caspase1,pycard和Txnip-1/2行RT-qPCR檢測,以期明確急性腎損傷組織中Nrf2的作用情況。結果:注射葉酸48小時后,1、Nrf2~(+/+)小鼠和Nrf2~(-/-)小鼠中的腎臟體積均增大,血清尿素氮和肌酐水平都較對照組明顯升高,且Nrf2~(-/-)小鼠水平更高具有統(tǒng)計學差異。2、石蠟切片HE和PAS染色顯示,Nrf2~(+/+)小鼠和Nrf2~(-/-)小鼠腎臟病理出現(xiàn)急性腎損傷,且Nrf2~(-/-)小鼠更重。PAS染色定量分析,得出Nrf2~(-/-)小鼠的病理損傷更重。3、葉酸組,抗氧化應激基因Nqo1,Gclc,Gclm的m RNA的表達下調(diào),且Nrf2~(-/-)組基因下調(diào)水平更顯著。提示Nrf2的缺失抑制抗氧化應激反應。4、Nrf2~(-/-)小鼠中IL-6和TNF-α的mRNA水平升高的程度具有統(tǒng)計學差異。5、TUNEL染色顯示,Nrf2~(-/-)小鼠的凋亡程度明顯多于Nrf2~(+/+)小鼠。6、葉酸組中Nrf2~(-/-)小鼠的GPX4的mRNA水平較Nrf2~(+/+)小鼠明顯下調(diào),ACSL4的mRNA水平較Nrf2~(+/+)小鼠有上調(diào)趨勢。7、葉酸組的Mthfd mRNA的表達水平明顯升高,但Nrf2~(+/+)與Nrf2~(-/-)組無差異。結論:1、Nrf2對葉酸誘導的急性腎損傷具有保護作用。2、Nrf2在葉酸誘導的急性腎損傷中的作用機制可能是:Nrf2抑制炎性因子,Nrf2抑制氧化應激,Nrf2抑制凋亡,Nrf2抑制鐵死亡。
【學位單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學碩士學位論文2-/-小鼠對 100mg/kg 的葉酸誘導的急性腎損傷更敏感酐和尿素氮是診斷急性腎損傷的關鍵指標，將葉酸粉末溶解為均勻的溶液，靜脈注射于Nrf2+/+小鼠和Nrf2-/-小鼠。48小時和尿素氮，主要比較Nrf2+/+小鼠實驗組與對照組及兩個實驗果可以看出在注射葉酸48小時后，Nrf2+/+小鼠和Nrf2-/-小鼠中合急性腎損傷的腎臟的大體表現(xiàn)（圖1A）。注射葉酸2天后不還是血清肌酐水平都較未注射葉酸組明顯升高，并且Nrf2-/-小血清肌酐水平更高，且具有統(tǒng)計學差異（圖1 B和圖1 C）。

中國醫(yī)科大學碩士學位論文3.3 病理染色結果顯示 Nrf2-/-小鼠急性腎損傷時病理損傷更重石蠟切片 HE 和 PAS 染色顯示，注射葉酸 2 天后，Nrf2+/+小鼠和 Nrf2-/-小鼠腎臟病理出現(xiàn)急性腎損傷，具體表現(xiàn)為上皮細胞扁平化或空泡樣變性，腎小管刷狀緣消失，腎小管管腔擴張，腎間質(zhì)炎性細胞浸潤等，且 Nrf2-/-小鼠的病理損傷更重（圖2A）。為進一步確定各組急性腎損傷的程度，我們在 PAS 染色片中進行損傷定量分析，方法為在 200X 鏡下，取 20 個視野。一個視野中未出現(xiàn)損傷評分為 0,0-25%的損傷程度評分為 1，25%-50%的損傷程度評分為 2，50%-75%的損傷程度評分為3,>75%的損傷程度評分為 4，得出 Nrf2-/-小鼠的病理損傷更重，且具有統(tǒng)計學差異。

中國醫(yī)科大學碩士學位論文3.4 注射葉酸后，Nrf2+/+小鼠和 Nrf2-/-小鼠氧化應激相關指氧化應激參與了急性腎損傷的發(fā)生發(fā)展，Nrf2 作為核轉錄因子氧化應激基因的表達，我們檢測了抗氧化應激的基因 Nqo1,Gclc,Gclm平發(fā)現(xiàn)，葉酸注射后，不管是 Nrf2+/+組還是 Nrf2-/-組，抗氧化應激基因且 Nrf2-/-組基因下調(diào)水平更顯著，具有統(tǒng)計學意義（圖 3）。提示注射的缺失抑制抗氧化應激反應。
【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 Martin L Pall;Stephen Levine;;Nrf2是調(diào)控解毒、抗氧化、抗炎等細胞保護機制的重要轉錄因子——它的活性可被保健食物及其他因素增強(英文)[J];生理學報;2015年01期

本文編號：2874476