目的:本研究觀察炎癥因子IL 1-β對高脂負荷下人腎臟系膜細胞(Human glomerular mesangial cells,HMCs)C型尼曼匹克蛋白1(Niemann-pick Protein C1,NPC1)表達的影響,并初步探討NPC1介導的膽固醇積聚導致腎系膜細胞損傷的作用機制。方法:體外培養(yǎng)HMCs,將其分為正常對照組、高脂組、高脂+炎癥組。Western blot檢測NPC1蛋白含量;酶法檢測細胞總膽固醇及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇濃度;CCK8法檢測細胞增殖變化;流式細胞術(shù)檢測HMCs細胞周期;實時熒光定量PCR檢測細胞內(nèi)NPC1、GRP78、PERK、ATF6、FN、Col IV mRNA的表達;免疫熒光技術(shù)檢測NPC1、GRP78、FN的熒光強度以及NPC1/LAMP-1共定位。予以NPC1阻斷劑u18666a干預后,觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇、細胞增殖以及GRP78、FN、Col IV mRNA水平的變化。結(jié)果:高脂可促進HMCs NPC1的表達,同時使細胞總膽固醇及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇水平增加,增殖加快、S期比例增加、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)分子—GRP78、PERK、ATF6及系膜基質(zhì)成分—FN、Col IV mRNA水平均顯著增加,GRP78、FN的熒光強度也明顯增加;炎癥進一步上調(diào)高脂負荷下上述各指標水平。u18666a干預NPC1后可減輕高脂和炎癥導致的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇積聚及細胞損傷。結(jié)論:炎癥可通過上調(diào)NPC1表達,加重高脂負荷下腎系膜細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇積聚,誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及細胞損傷。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

各組HMCsNPC1的表達

檢測各組 HMCs NPC1 的表達&平均熒光強度 (400×)。*p<0.05,**p<0.01 與對照組比較▲p<0.05 與高脂+炎癥組比較。mmunofluorescence detection of NPC1 & Mean fluorescence intensity in different groups(400×). *p<0.05,**p<0.01 vs CTL group, ▲p<0.05 vs LDL+IL-1β group./LAMP-1 免疫熒光共定位相關(guān)膜蛋白（Lysosome Associated Membrane Protein-1,LAMP-1）是溶記蛋白，共聚焦顯微鏡下觀察 NPC1 和 LAMP-1 共定位。NPC1 在呈紅光，LAMP-1 在 FITC 激發(fā)呈綠光。半定量分析共定位系數(shù)rrelation，結(jié)果（圖 3）所示：與對照組（0.52±0.03）相比，高脂+

29PC1/LAMP-1 免疫熒光共定位&共定位系數(shù) (400×).*p<0.05 與對照組比較，高脂+炎癥組比較。unofluorescence colocalization of NPC1/LAMP-1 & Pearson's Colocalization igroups (400×). *p<0.05 vs CTL group, ▲p<0.05 vs LDL+IL-1β group.胞內(nèi)總膽固醇及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇濃度 4）所示：細胞內(nèi)總膽固醇濃度及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇濃度，與對照組（64.117±5.41）相比，高脂組（88.13±6.98，65.99±3.97）、高脂+炎癥10.46，92.39±4.83）均顯著增加（P 分別<0.05，<0.001）；與高脂癥+炎癥組細胞內(nèi)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇沉積進一步增加（P 均<0.05）。提
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 于小函;邸波;;腎小球系膜細胞與糖尿病腎病[J];醫(yī)學研究雜志;2015年09期

2 劉練;張高福;李秋;王墨;;阿霉素腎病小鼠的腎臟病理轉(zhuǎn)變過程[J];中國實驗動物學報;2014年02期

本文編號：2861239