目的:Intermedin[IMD,又稱腎上腺髓質(zhì)素-2(ADM-2)]能夠通過抑制腎組織局部的氧化應(yīng)激來減輕腎臟纖維化,但是確切機制尚不清楚。血紅素加氧酶-1(HO-1)具有抗纖維化作用。既往有研究表明,與IMD同源、結(jié)構(gòu)和功能類似的ADM可以誘導(dǎo)HO-1產(chǎn)生。但IMD對HO-1是否有影響目前尚未見報道。本實驗通過研究IMD對單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)大鼠及大鼠近端小管上皮細胞系(NRK-52E)HO-1的影響,闡明IMD是否通過誘導(dǎo)HO-1減輕腎纖維化。方法:用雄性Wistar大鼠制作UUO模型誘導(dǎo)腎纖維化。用重組人轉(zhuǎn)化生長因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)刺激NRK-52E以建立體外上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)模型。將質(zhì)粒pcDNA3.1-IMD轉(zhuǎn)染UUO大鼠梗阻側(cè)腎臟組織和NRK-52E,使IMD高表達。用鋅原卟啉(ZnPP)抑制HO-1酶活性,觀察IMD是否通過抑制HO-1起到腎臟保護作用。用定量RT-PCR、Western blot法或免疫組織化學法檢測IMD對HO-1表達的影響。通過膽紅素的產(chǎn)生量來測定HO活性。Masson染色觀察腎臟病理改變并進行半定量分析,用RT-PCR法檢測膠原蛋白I的mRNA表達,用Western blot法檢測其蛋白質(zhì)表達。通過免疫組織化學法分析巨噬細胞浸潤和IL-6表達的情況,以評估炎癥反應(yīng)。通過Western blot法及免疫熒光法測定α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和E-鈣粘蛋白表達來評估EMT。結(jié)果:轉(zhuǎn)染IMD基因的UUO大鼠梗阻側(cè)腎臟和NRK-52E中HO-1表達和HO活性增加,說明IMD能誘導(dǎo)HO-1。UUO模型梗阻側(cè)腎臟在術(shù)后第7 d表現(xiàn)出明顯的間質(zhì)纖維化,IMD基因轉(zhuǎn)染的UUO大鼠梗阻側(cè)腎臟間質(zhì)纖維化程度明顯減輕。UUO大鼠梗阻側(cè)腎臟有大量巨噬細胞浸潤,IL-6表達明顯升高,轉(zhuǎn)染IMD后能抑制巨噬細胞的浸潤和IL-6的表達,說明IMD能抑制腎臟局部炎癥反應(yīng)。UUO大鼠的梗阻側(cè)腎臟和NRK-52E中E-鈣粘蛋白的表達下調(diào),同時α-SMA的表達增加,表明發(fā)生了EMT,IMD基因轉(zhuǎn)染能抑制EMT。HO活性抑制劑ZnPP能阻斷IMD的腎臟保護作用。結(jié)論:IMD可以通過誘導(dǎo)HO-1來減輕腎臟纖維化。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R692
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學（博）碩士學位論文2 結(jié) 果.1 IMD 轉(zhuǎn)染結(jié)果通過定量 RT-PCR 和 western blot 法檢測 IMD 的轉(zhuǎn)染結(jié)果。實驗結(jié)果顯示 7 d 后，與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比，用質(zhì)粒 pcDNA3.1-IMD 轉(zhuǎn)染的 UUO 大鼠梗臟（圖 1a-c）和 NRK-52E 中 IMD 的表達顯著增加（圖 1d-f）。證明 IMD染到 UUO 大鼠梗阻側(cè)腎臟或 NRK-52E 中。

山西醫(yī)科大學（博）碩士學位論文結(jié)果顯示，在假手術(shù)大鼠腎組織中 HO-1 的 mRNA 和蛋白質(zhì)表達水平非常低，而在 UUO 大鼠梗阻側(cè)腎臟中表達顯著增加。轉(zhuǎn)染 IMD 質(zhì)粒后梗阻側(cè)腎臟中 HO-1的表達進一步增加，而空質(zhì)粒組 HO-1 水平與 UUO 組無明顯差別。用 IMD 和 ZnPP共處理的 UUO 大鼠梗阻側(cè)腎組織中 HO-1 mRNA 和蛋白質(zhì)的表達水平較 IMD 處理組進一步增加（圖 2a 和 b）。通過免疫組織化學方法也證實了 IMD 基因轉(zhuǎn)染后 HO-1的表達上調(diào)，加入 ZnPP 后，HO-1 的表達較單純 IMD 轉(zhuǎn)染組進一步增加，而空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不影響 HO-1 的表達水平（圖 2c）。與假手術(shù)組相比，UUO 梗阻側(cè)腎臟中的 HO 活性顯著增加。轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對 HO 活性沒有明顯影響，轉(zhuǎn)染 IMD 后 UUO 梗阻側(cè)腎臟中的 HO 酶活性較 UUO 組明顯升高。加入 ZnPP 的后 IMD 的上述作用消失（圖 2d）。

15圖 3 IMD 對 rhTGF-β1 刺激的 NRK-52EHO-1 表達和 HO 活法檢測 NRK-52E 中 HO-1 蛋白質(zhì)表達水平的代表性結(jié)果。b。與假手術(shù)組對比，*P＜0.05，與 UUO 組對比，#P＜0.05，過誘導(dǎo) HO-1 抑制 UUO 大鼠梗阻側(cè)腎臟纖間質(zhì)纖維化用 Masson 染色及 Col-I 的表達量來檢測。手術(shù)組中沒有發(fā)現(xiàn)明顯的纖維化表現(xiàn)。與假手術(shù)組側(cè)腎臟出現(xiàn)了明顯的腎小管間質(zhì)纖維化。而 IMD 質(zhì)小管間質(zhì)纖維化較前明顯減輕。為了確定 IMD 是否

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本文編號：2834874