目的探討MIR(微小RNA)-92a,MIR-100及MIR-143的表達(dá)水平對膀胱癌的診斷價(jià)值。方法收集我院2016年10月~2017年4月期間,50例臨床及病理診斷為膀胱癌的患者的血清及50例健康受試者的血清,通過從膀胱癌患者或健康受試人群的肘正中靜脈抽取10mL血,存放入含有乙二胺四乙酸二鈉的試管中,隨后將其置于離心機(jī)中,離心3000rpm,4℃,離心10min,然后再置入離心機(jī)中,5000rpm,4℃,離心5min。離心結(jié)束后,迅速取上清液移至凍存管內(nèi),在凍存管上寫好編號及日期,蓋好管帽,置入凍存盒中,冰箱過夜(-80℃),第二天將其移入到液氮罐中保存?zhèn)溆�。我們只選用非溶解性紅細(xì)胞的血液樣本,因?yàn)槿芙庑缘募t細(xì)胞容易影響MIRNA的水平。溶解性的紅細(xì)胞通過541nm的光譜探測檢測出。接著取出提取的血清(擰緊),立即放入37.0℃的水浴箱中,1min后從中取血清樣本,利用Trizol法提取血清中的提取總RNA,并用提取的MIRNA取5ul利用MIRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)的條件為:16℃30 min、42℃30min、85℃5 min。當(dāng)MIRNA反轉(zhuǎn)錄完成后,取5ul利用RT-qPCR將其進(jìn)行擴(kuò)增。取25ul樣本液應(yīng)用SYBR Green PCR試劑盒將放入周圍溫度為95℃的環(huán)境中15min,接著放入94℃15s,55℃30s,70℃34s進(jìn)行40個(gè)循環(huán),然后在70℃環(huán)境中進(jìn)行MIRNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測。以U6作為內(nèi)參,根據(jù)系統(tǒng)生成的樣本拷貝數(shù),通過應(yīng)用RT-qPCR(實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng))檢測血清中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的表達(dá)水平,并應(yīng)用ROC曲線(受試者工作特征曲線)計(jì)算MIR-92a,MIR-100及MIR-143的臨界值,同時(shí)利用所得到的臨界值單獨(dú)或聯(lián)合檢測血清樣本中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的相對表達(dá)水平,計(jì)算其靈敏度及特異度。結(jié)果(1)MIRNA的相對表達(dá)水平膀胱癌患者的血清中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的相對表達(dá)水平相對于健康人群組(50人)明顯降低,而且MIR-143的相對表達(dá)水平在MIBC(35人)與NMIBC(15人)中有顯著的不同(各組數(shù)據(jù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05)。(2)血清中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的相對表達(dá)水平對膀胱癌的診斷價(jià)值:通過單獨(dú)檢測分析發(fā)現(xiàn)MIR-92a的靈敏度為96.0%,特異度為74.0%;MIR-100的靈敏度為86.0%,特異度為65.0%;MIR-143的靈敏度為74.0%,特異度為90.0%;MIR-100和MIR-92a組合的靈敏度為88.0%,特異度為82.0%;MIR-92a和MIR-143組合的靈敏度為92.0%,特異度為92.0%;MIR-143和MIR-100組合的靈敏度為86.0%,特異度為82.0%。(3)MIR-92a與MIR-143組合在診斷膀胱癌中具有較好的診斷價(jià)值,可以作為血清檢測膀胱癌的潛在標(biāo)記物。結(jié)論(1)與健康人群的MIR-92a,MIR-100及MIR-143相對表達(dá)水平比較,在膀胱癌患者中三種MIRNAs的表達(dá)水平是明顯降低的,而且血清中MIR-143的相對表達(dá)水平可以作為膀胱癌患者中區(qū)別MIBC與NMIBC的初步診斷指標(biāo)(P0.05)。(2)通過本實(shí)驗(yàn)可以看出MIR-92a,MIR-100及MIR-143可以作為初步診斷膀胱癌的潛在標(biāo)記物。(3)應(yīng)用ROC曲線(受試者工作特征曲線)分析了單獨(dú)的MIR-92a,MIR-100、MIR-143以及兩者或三者組合聯(lián)合檢測對膀胱癌診斷的價(jià)值。根據(jù)結(jié)果顯示兩者組合中MIR-92a與MIR-143組合的靈敏度及特異度最高,MIR-92a和MIR-143組合的靈敏度為92.0%,特異度為92.0%;與三者組合相比MIR-92a與MIR-143組合無明顯差異。(4)MIR-92a與MIR-143組合在診斷膀胱癌中具有較好的診斷價(jià)值,可以作為血清檢測膀胱癌的潛在標(biāo)記物。
【學(xué)位單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.14
【部分圖文】：

1總RNA瓊脂糖凝膠電泳紫外成像 Total RNAagarose gel electrophoresis u下依次為 5S、18S、28S; 5S 隱約可見，而 2的亮度約為 18S 條帶的兩倍，由此可知總 R其完整性較好 is faintly visible and 28S and 18S bands are o bands is about twice as bright as the band of 1s no obvious degradation and its integrity is be

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2814210