【摘要】：背景:腎小球是血液的“過濾器”,而在其中包含的固有細胞有三個類別,它們分別是:內(nèi)皮細胞、系膜細胞以及足細胞,而在它們當中足細胞是終末分化細胞的其中一類,其表型穩(wěn)定,足細胞損傷是慢性腎臟病出現(xiàn)及進展的主要環(huán)節(jié)。足細胞在刺激下鈣離子內(nèi)流啟動并激活下游信號通路引起其損傷。瞬時受體電位通道6(TRPC6)是眾多鈣離子內(nèi)流調(diào)節(jié)通道中的一種,并在目前的研究中體現(xiàn)出越來越大的作用。在疾病中Ca2+內(nèi)流而TRPC6通道發(fā)揮其重要的功能�，F(xiàn)如今有相關資料表明在急性高血壓時TRPC6調(diào)控胞內(nèi)鈣離子增加,崩解線粒體,并有足細胞凋亡的情況出現(xiàn)。具體的機制可能為TRPC6激活后鈣離子內(nèi)流增大,胞漿內(nèi)鈣離子濃度增大,線粒體鈣濃度過載,繼而細胞核內(nèi)鈣離子增加,導致轉(zhuǎn)錄過程異常,一系列的變化最終導致細胞凋亡。為了確認該機制,我們確定將建立急性高血壓小鼠足細胞損傷的模型,利用基因干擾技術(shù)以及特異性蛋白/通道抑制劑,努力發(fā)現(xiàn)導致足細胞損傷的具體原因和作用機制,以及通過TRPC6調(diào)控鈣離子內(nèi)流的方式。通過檢測Ca2+-dependent信號通路,闡明TRPC6在網(wǎng)絡調(diào)控中的具體方式、作用機制;干預其在體內(nèi)及體外的進展與變化,探索通過阻斷TRPC6通道的靶點來減輕足細胞損傷的可能,努力探尋新的理論依據(jù)于臨床治療中。目的:本研究采用“活體冷凍技術(shù)”處理小鼠腎組織標本,目的是在原位(in situ)保持小鼠腎小球足細胞的TRPC6的穩(wěn)定狀態(tài)和結(jié)構(gòu)特點,通過運用免疫組化、免疫熒光、Real Time-PCR之類的技術(shù)來獲得處于異常血液動力學條件下(特別是在急性高血壓的條件下),TRPC6蛋白在足細胞上的實時改變。以及查看急性高血壓時線粒體的數(shù)量和形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化特點于透射電鏡下。方法:1.實驗動物:準備昆明小鼠10只,體重在25-35克范圍內(nèi),均為雄性鼠,購買自北京維通利華公司。2.實驗分組:(1)應用IVCT固定的正常血流組5只(2)應用IVCT固定的異常血流組5只(迅速建立急性高血壓模型,具體為結(jié)扎昆明小鼠腹主動脈15分鐘左右)3.觀察腎小球結(jié)構(gòu)在異常血流動力學(特別是急性高血壓)條件下形態(tài)學上的改變,并盡可能的利用IVCT技術(shù)探尋TRPC6在該條件下的動態(tài)變化與結(jié)構(gòu)特點,熟練應用HE染色、免疫組化以及免疫電鏡等技術(shù)完善對上述變化的觀察。如條件足夠,將在進一步的實驗中應用諸如western blot等技術(shù)進一步探尋TRPC6表達的定量觀察。以及查看急性高血壓時線粒體的數(shù)量和形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化特點于透射電鏡下。結(jié)果:通過對昆明鼠制造急性高血壓模型,我們在接下來的實驗里繼續(xù)探究在血流動力學條件不同時鼠腎小球的TRPC6表達的不同和和具體的分布情況的改變,并順帶觀察腎小球的結(jié)構(gòu)于顯微鏡下的改變。1.TRPC6在腎小球足細胞的分布變化:a.我們觀察到在血流條件正常時,TRPC6蛋白沿著昆明鼠腎小球毛細血管袢表達,大致為連續(xù)顆粒狀分布;b.但是在急性高血壓時(人工造模:結(jié)扎昆明小鼠腹主動脈15分鐘),TRPC6開始在胞漿內(nèi)出現(xiàn)并向核周及核內(nèi)轉(zhuǎn)移,而其在毛細血管袢的表達顯著降低,并斷續(xù)分布。2.昆明鼠腎小球于急性高血壓時組織結(jié)構(gòu)的改變:通過顯微鏡觀察a.血流條件正常時,腎小囊毛細血管表面光滑,可見紅細胞于其中固定,血管形態(tài)飽滿,可見裂隙狀的Bowman囊;b.在急性高血壓時(人工造模:結(jié)扎昆明小鼠腹主動脈15分鐘)依然可見紅細胞于其中固定,但不如a組飽滿,同時可見腫脹的Bowman囊和腎小管。結(jié)論:1.急性高血壓條件下TRPC6蛋白在足}0胞的表達減少。2.在急性高血壓條件下TRPC6在胞漿內(nèi)增加并向核周及核內(nèi)轉(zhuǎn)移。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R544.1;R692
【圖文】：

中國醫(yī)科大學碩士學位論文3 結(jié)果1. 急性高血壓鼠腎小球的組織結(jié)構(gòu)：昆明鼠腎小球于急性高血壓時組織結(jié)構(gòu)的改變：血流條件正常時,腎小囊毛細血管表面光滑，可見紅細胞于其中固定，血管形態(tài)飽滿，可見裂隙狀的 Bowman囊；而在急性高血壓時（人工造模：結(jié)扎昆明小鼠腹主動脈 15 分鐘）依然可見紅細胞于其中固定，但不如 a 組飽滿，同時可見腫脹的 Bowman 囊和腎小管。（見圖 1）

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本文編號：2766587