【摘要】：目的:觀察細(xì)胞焦亡指標(biāo)和αKlotho在糖尿病腎病大鼠模型以及高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞損傷模型中的改變,探討αKlotho以及Caspase-1介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡與糖尿病腎小管上皮細(xì)胞損傷之間的關(guān)系。方法:(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):30只SD大鼠分為模型組(n=20)和對照組(n=10),高脂飲食后小劑量鏈脲佐菌素(STZ)注射建立糖尿病腎病模型,于造模成功后第12周收集大鼠的血液及腎組織。記錄體重和血糖變化,血清生化分析檢查腎功能和血脂變化,HE和Masson染色觀察腎臟光鏡改變,電鏡觀察腎組織超微結(jié)構(gòu)。Western Blotting檢測αKlotho、Csapase-1的蛋白表達(dá)水平,RT-qPCR檢測αKlotho、Csapase-1的mRNA水平。(2)體外實(shí)驗(yàn):體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)分為對照組(control,Con48h組)、高滲組(hyper osmosis,HO48h組)、高糖組(high glucose,HG1h、HG6h、HG24h、HG48h組)、αKlotho加高糖組(high glucose/αKlotho,HG/K 0pM、HG/K 100pM、HG/K 200pM、HG/K 400pM組)�？梢姺止夤舛确z測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活性,Western Blotting檢測αKlotho、Csapase-1、GSDMD的蛋白表達(dá)水平,RT-qPCR檢測αKlotho、Csapase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA水平,ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液以及細(xì)胞裂解液中IL-1β濃度。結(jié)果:(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):成功建立糖尿病腎病大鼠模型,病理可見腎小球僅輕度肥大,腎小管上皮細(xì)胞腫脹、空泡變性,腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤。模型大鼠腎組織αKlotho表達(dá)下降,Caspase-1表達(dá)升高,與對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(2)體外實(shí)驗(yàn):高糖作用后細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性逐漸升高,48h活性達(dá)高峰(p0.001);細(xì)胞焦亡指標(biāo)Caspase-1在高糖刺激后逐漸升高,48h表達(dá)量達(dá)高峰(p0.05);與Con48h組相比,HG48h組Caspase-1、IL-1β表達(dá)量升高(p0.05),GSDMD的mRNA表達(dá)量升高(p0.01),但蛋白水平未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.234);αKlotho表達(dá)量降低(p0.05);外源性補(bǔ)充αKlotho,隨著作用濃度的升高,腎小管上皮細(xì)胞Caspase-1、IL-1β以及LDH活性逐漸下降(p0.05),在濃度為200pmol/L時(shí),抑制作用最強(qiáng)。結(jié)論:αKlotho抑制Caspase-1介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡,減輕糖尿病腎小管上皮細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2;R692.9
【圖文】：

果糖尿病大鼠的一般情況 體重的變化SD 大鼠高脂飲食 8 周后，腹腔注射小劑量 STZ，20 只大成模率為 60%。模型成功后第 12 周，對照組 2 只大鼠死亡大鼠死亡。0 周時(shí)模型組體重高于對照組，差異有統(tǒng)0.004）；12 周時(shí)模型組體重低于對照組，差異有統(tǒng)0.001）。模型組大鼠 12 周時(shí)與 0 周時(shí)相比，體重明顯降低學(xué)意義（p<0.001）。

21圖 2 大鼠血糖變化on：對照組，Mod：模型組，F(xiàn)：空腹血糖，R：隨機(jī)血糖，2h：禁食兩小時(shí)后血糖，d天數(shù)，數(shù)據(jù)以均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差表示。圓點(diǎn)表示為模型組每只大鼠的空腹血糖值，三角形每只大鼠空腹血糖值，菱形表示模型組每只大鼠隨機(jī)或者禁食 2h 后血糖值。 生化指標(biāo)的改變模型成功后第 12 周時(shí)處死大鼠，血生化結(jié)果顯示對照組和模型平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.265），尿素氮水平模型組高于對

低于對照組（p=0.251）。表 1 大鼠血清生化指標(biāo)的改變指標(biāo) 對照組 模型組 P 值肌酐（μmol/L） 38.25±1.40 32.85±4.30 0.26素氮（mmol/L） 7.37±0.41 16.68±1.16 <0.00固醇（mmol/L） 1.53±0.05 1.32±0.15 0.21油三酯（mmol/L） 0.41±0.04 0.36±0.26 0.25糖尿病大鼠腎臟病理改變 光鏡改變模型組大鼠局部可見腎小球輕度肥大，腎小管上皮細(xì)胞空泡變質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤。

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8 劉U

本文編號：2756914