【摘要】：目的:信號素蛋白-3a(Semaphorin-3a)在急性腎損傷中扮演著重要的角色,并有可能作為一種早期診斷的生物標(biāo)志物,我們的研究主要探討Sema3A蛋白在脂多糖誘導(dǎo)的急性腎損傷的小鼠模型中的作用。方法:按劑量將脂多糖(LPS,10mg/kg)腹腔注射進(jìn)入野生型(WT)的雄性C57BL/6小鼠建立急性腎損傷模型。采集外周血液用于檢測腎功能,收集腎臟組織部分用于組織蛋白免疫印跡法(WB)分析,剩余腎臟組織石蠟包埋切片用于HE染色的組織病理損傷分析和Sema3A、中性粒細(xì)胞(Ly6G)及巨噬細(xì)胞(F4/80)抗原的免疫組化分析。腎組織中的腎小管上皮細(xì)胞的凋亡通過TUNEL方法進(jìn)行檢測。此外,用LPS在體外刺激大鼠永生腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E),利用WB方法對細(xì)胞相關(guān)的炎癥蛋白表達(dá)變化和凋亡蛋白表達(dá)變化進(jìn)行檢測。同時(shí),炎癥蛋白的表達(dá)變化同時(shí)也通過細(xì)胞免疫熒光進(jìn)行檢測,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡的數(shù)量變化。結(jié)果:Sema3A在LPS誘導(dǎo)的急性腎損傷的腎臟組組中的表達(dá)增加,并且通過抑制Sema3A可以減輕LPS誘導(dǎo)的腎臟組織的炎癥損傷和腎小管上皮細(xì)胞的凋亡。同時(shí),體外研究也表明LPS刺激NRK-52E后Sema3A的表達(dá)同樣也明顯增加,抑制Sema3A后可以緩解LPS誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和凋亡損傷。此外,我們還發(fā)現(xiàn)Ras相關(guān)的C3肉毒素底物1(Rac1)/核因子(NF)-κB/p65和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信號通路分別參與了 Sema3A介導(dǎo)的小管上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和凋亡損傷過程。結(jié)論:這些結(jié)果表明Sema3A在LPS誘導(dǎo)的小鼠的急性腎損傷的腎臟組織中出現(xiàn)表達(dá)升高,預(yù)示著Sema3A可能在加劇腎小管上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和凋亡損傷中扮演著重要的角色。Rac1/NF-κB/p65和JNK信號通路也可能參與了 Sema3A介導(dǎo)的小管上皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和凋亡損傷的過程。生物學(xué)針對Sema3A蛋白的手段一定程度上有可能成為膿毒癥相關(guān)的腎損傷的早期階段有效的治療措施。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R692.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙向陽;陳凜;許倩;李玉紅;;Semaphorin6D在胃癌中的表達(dá)及其意義[J];世界華人消化雜志;2006年33期

本文編號：2719754