【摘要】：目的:通過檢測缺氧損傷后腎小球系膜細(xì)胞中Prohibitin1(PHB1)、Prohibitin2(PHB2)的表達(dá)水平,探討PHB1、PHB2在腎小球系膜細(xì)胞缺氧損傷中的作用。方法:將體外培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞隨機(jī)分為兩組:正常組和模型組。正常組在常規(guī)條件下培養(yǎng),不做任何干預(yù)處理,模型組置于缺氧小室中,充缺氧氣體(950 m L·L-1 N2和50 m L·L-1 CO2)密封24h、48h建立腎小球系膜細(xì)胞缺氧損傷模型。于缺氧24h、48h后,收集細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。倒置光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),試劑盒檢測細(xì)胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和線粒體膜電位變化情況,細(xì)胞計(jì)數(shù)CCK 8試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法檢測細(xì)胞活力,流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction,Real-time-PCR)檢測細(xì)胞PHB1、PHB2、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的m RNA表達(dá)水平,Western blot法檢測細(xì)胞PHB1、PHB2、TGF-β1、α-SMA、Ⅳ型膠原(collagen-IV,Col-IV)蛋白和纖維粘連蛋白(Fibronectin,FN)的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.光鏡下正常組系膜細(xì)胞呈長梭型,胞體舒展飽滿,排列有序,細(xì)胞間隙適中,模型組細(xì)胞呈狹長型,胞體細(xì)長,形態(tài)萎縮,細(xì)胞間隙增寬加深,細(xì)胞碎片增多,缺氧48h組細(xì)胞形態(tài)改變較缺氧24h組改變更加明顯。2.與正常組相比,模型組系膜細(xì)胞的PHB1和PHB2的m RNA及其蛋白表達(dá)均顯著下降(均P0.05);與缺氧24h組相比,缺氧48h組細(xì)胞的PHB1和PHB2的m RNA及其蛋白表達(dá)均顯著下降(均P0.05)。3.與正常組相比,模型組系膜細(xì)胞的ROS顯著升高(P0.05),線粒體膜電位顯著下降(P0.05);與缺氧24h組相比,缺氧48h組細(xì)胞的ROS顯著升高(P0.05),線粒體膜電位顯著下降(P0.05)。4.與正常組相比,模型組系膜細(xì)胞的TGF-β1的m RNA及其蛋白表達(dá)、α-SMA的m RNA及其蛋白表達(dá)、以及Col-IV和FN蛋白表達(dá)均顯著升高(均P0.05);與缺氧24h組相比,缺氧48h組細(xì)胞TGF-β1的m RNA及其蛋白、α-SMA的m RNA及其蛋白表達(dá)、以及Col-IV和FN蛋白表達(dá)均顯著升高(均P0.05)。5.與正常組相比,模型組系膜細(xì)胞的凋亡率顯著升高(P0.05),細(xì)胞活力顯著下降(P0.05);與缺氧24h組相比,缺氧48h組細(xì)胞的凋亡率顯著升高(P0.05),細(xì)胞活力顯著下降(P0.05)。6.相關(guān)性分析:模型組系膜細(xì)胞的PHB1和PHB2的蛋白表達(dá)與TGF-β1、α-SMA、Col-IV和FN的蛋白表達(dá)及ROS含量、細(xì)胞凋亡率均呈顯著負(fù)相關(guān)(均P0.05),與線粒體膜電位、細(xì)胞活力均呈顯著正相關(guān)(均P0.05)。結(jié)論:在系膜細(xì)胞缺氧模型中,PHB1和PHB2表達(dá)顯著降低參與了細(xì)胞缺氧損傷過程,缺氧時(shí)間越長,PHB1和PHB2表達(dá)降低越明顯,細(xì)胞損傷越重。其機(jī)制可能與PHB1和PHB2表達(dá)降低使ROS升高,線粒體膜電位降低,上調(diào)TGF-β1和ɑ-SMA表達(dá)從而導(dǎo)致ECM積聚有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R692
【圖文】：

Prohibitin1 和 Prohibitin2 在腎小球系膜細(xì)胞缺氧損傷中的表達(dá)及作用 2018 屆碩士學(xué)位3.結(jié) 果3.1 系膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化光鏡下觀察正常組系膜細(xì)胞呈長梭型，胞體舒展，形態(tài)飽滿，細(xì)胞隙適中，模型組系膜細(xì)胞呈狹長型，胞體細(xì)長，形態(tài)萎縮，細(xì)胞間隙增加深，與正常組細(xì)胞有明顯的差異，缺氧 48h 組與缺氧 24h 組比較，細(xì)形態(tài)改變的更加明顯。見圖 1-1。正常細(xì)胞形態(tài) 缺氧 24h 細(xì)胞形態(tài) 缺氧 48h 細(xì)胞形態(tài)

圖 1-2 兩組系膜細(xì)胞各時(shí)間點(diǎn)活力比較Fig.1-2 Comparison of cell activity in the two groups of mesangial cells at each time poi（*：compared with normal group，P<0.05，△：compared with 24h model group，P<0.0膜細(xì)胞凋亡率比較與正常組相比，模型組系膜細(xì)胞凋亡率顯著升高（P ＜ 0.05），4h 模型組相比，缺氧 48h 模型組系膜細(xì)胞凋亡率顯著升高（P ＜ -8、圖 1-3 和附圖 3-1、附圖 3-2、附圖 3-3、附圖 3-4。表-8 兩組系膜細(xì)胞各時(shí)間點(diǎn)凋亡率組別/時(shí)間 24 小時(shí) 48 小時(shí)正常組 5.20％±0.75％ 5.47％±0.58％模型組 11.94％±2.06％*22.20％±4.66％*&

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2718923