發(fā)布時(shí)間：2020-05-17 09:04

【摘要】：目的當(dāng)前列腺癌進(jìn)展為激素抵抗性前列腺癌階段,化療成為主要的治療手段。但化療藥物由于缺乏靶向性,往往造成嚴(yán)重的副作用,極大的限制了其應(yīng)用。近年來隨著納米技術(shù)的快速發(fā)展,納米載藥體系在增強(qiáng)腫瘤的化療效果方面得到了廣泛的研究。然而,由于腫瘤的異質(zhì)性,單一的化療方式很難完全消除腫瘤。解決辦法之一是結(jié)合幾種不同作用機(jī)制的治療方式。光動(dòng)力治療(photodynamic therapy,PDT)作為一種重要的臨床批準(zhǔn)的非侵入性治療方式,在腫瘤治療中得到了廣泛的研究。此外,為了進(jìn)一步提高納米載藥體系在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間,近年來有很多研究團(tuán)隊(duì)提出應(yīng)用生物膜系統(tǒng)構(gòu)建仿生載藥體系,并取得了良好的效果�；谏鲜鲅芯勘尘�,本課題設(shè)計(jì)并制備了具有靶向前列腺癌細(xì)胞功能的雙層仿生納米載藥體系,通過協(xié)同光動(dòng)力治療和化療實(shí)現(xiàn)了對(duì)前列腺癌的有效治療,為臨床治療前列腺癌提供了理論和研究基礎(chǔ)。方法本課題分為兩個(gè)實(shí)驗(yàn)部分:(1)我們?cè)O(shè)計(jì)并制備了紅細(xì)胞膜(RV)包被的、負(fù)載化療藥物10-羥基喜樹堿(HCPT)的聚谷氨酸-苯丙氨酸-胱氨酸納米凝膠(nanogel,NG)作為內(nèi)核的雙層仿生納米載藥體系,再將具有靶向前列腺癌細(xì)胞作用的促黃體生成激素釋放激素(Luteinizing hormone-releasing hormone,LHRH)修飾到紅細(xì)胞膜表面,該載藥體系(LHRH-RV-NG/HCPT)在延長納米載體血液循環(huán)時(shí)間的同時(shí)實(shí)現(xiàn)了化療藥物的靶向傳輸及在腫瘤細(xì)胞內(nèi)還原環(huán)境下的響應(yīng)性釋放,從而實(shí)現(xiàn)有效抑制前列腺癌進(jìn)展的目的。通過體外表征(粒徑大小、穩(wěn)定性、藥物釋放情況)、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞內(nèi)吞、細(xì)胞生長抑制)及體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)、藥物組織分布、體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn))評(píng)價(jià)該載藥體系的前列腺癌治療效果。(2)我們?cè)谏弦粋�(gè)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)之上,將光敏劑二氫卟吩E6(Ce6)負(fù)載到紅細(xì)胞膜的磷脂雙分子層內(nèi)部,構(gòu)建了多功能納米載藥體系(LHRH-RV/Ce6-NG/HCPT)來實(shí)現(xiàn)光動(dòng)力治療和化療對(duì)前列腺癌的協(xié)同治療。通過體外表征(粒徑大小、穩(wěn)定性、藥物釋放情況)、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞內(nèi)吞、活性氧產(chǎn)生檢測(cè)、細(xì)胞生長抑制)及體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)、藥物組織分布、體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn))評(píng)價(jià)該載藥體系的前列腺癌治療效果。結(jié)果第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,我們構(gòu)建的雙層仿生納米載體LHRH-RV-NG/HCPT具有典型的雙層結(jié)構(gòu),大小在100nm左右,外層的紅細(xì)胞膜保留了自身的蛋白成分,有效的減少了巨噬細(xì)胞對(duì)納米載體的清除。另外,聚氨基酸納米凝膠能夠?qū)δ[瘤還原微環(huán)境作出響應(yīng),進(jìn)而提高負(fù)載藥物的釋放速率。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LHRH的修飾有效的提高了腫瘤細(xì)胞對(duì)納米載體的內(nèi)吞,從而表現(xiàn)出良好的體外腫瘤細(xì)胞生長抑制效果。體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,紅細(xì)胞膜包被技術(shù)明顯的延長了LHRH-RV-NG/HCPT的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間,并且有效的提高了HCPT在腫瘤組織的蓄積。體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)表明,LHRH-RV-NG/HCPT相較于RV-NG/HCPT、NG/HCPT和游離HCPT表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制腫瘤生長及抗轉(zhuǎn)移效果,組織學(xué)及免疫組化結(jié)果證明LHRH-RV-NG/HCPT能更有效的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。此外,雙層納米載體并沒有引起明顯的組織器官毒性,表現(xiàn)出良好的體內(nèi)安全性。第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,LHRH-RV/Ce6-NG/HCPT除了具備LHRH-RV-NG/HCPT的優(yōu)勢(shì)以外,能在670nm近紅外光照作用下,有效的產(chǎn)生ROS,通過影響細(xì)胞膜磷脂雙分子層的流動(dòng)性和通透性,一方面破壞外包的紅細(xì)胞膜,進(jìn)一步加快納米凝膠中HCPT的釋放;另一方面進(jìn)一步增加了腫瘤細(xì)胞對(duì)LHRH-RV/Ce6-NG/HCPT的攝取。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,光動(dòng)力治療和化療的協(xié)同相較于單一治療方式表現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤生長抑制效果。體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步證明光動(dòng)力治療和化療的協(xié)同治療更加有效的抑制了前列腺癌的生長和轉(zhuǎn)移。結(jié)論本研究成功設(shè)計(jì)并制備了具有靶向作用的雙層仿生納米載藥體系,該載藥體系能夠通過被動(dòng)靶向和主動(dòng)靶向雙靶向作用于前列腺癌細(xì)胞,并且顯著的提高了血液循環(huán)時(shí)間,提高了藥物在腫瘤組織的濃度,進(jìn)而表現(xiàn)出優(yōu)良的抗腫瘤效果。此外,我們進(jìn)一步在該載藥體系的基礎(chǔ)之上,將光動(dòng)力治療引入其中,探究了光動(dòng)力治療和化療的協(xié)同在前列腺癌治療中的優(yōu)勢(shì)。研究結(jié)果證明光動(dòng)力治療和化療的協(xié)同相較于單一治療方式表現(xiàn)出更優(yōu)良的前列腺癌治療效果,能更加有效的抑制前列腺癌的生長和轉(zhuǎn)移。本研究為前列腺癌尤其是轉(zhuǎn)移性前列腺癌的治療提供了新的研究方向。
【圖文】：

亡人數(shù) 26600 人[2]。依據(jù) 2017 年 2 月國家癌癥中心發(fā)布的最新癌癥數(shù)城市化發(fā)展程度逐漸上升，大城市前列腺癌發(fā)病率 17.26/10 萬（居大病率第五位），中等城市 8.51/10 萬，小城市<5/10 萬，大城市發(fā)病率 4 倍。目前，我國城市地區(qū)的前列腺癌患病年齡高峰自 60 歲開始，相前列腺癌發(fā)病高峰要延后 10 歲。但可以預(yù)測(cè)，隨著時(shí)代的發(fā)展，我的絕對(duì)發(fā)病數(shù)將顯著增長。早期前列腺癌癥狀不明顯，大部分患者多現(xiàn)。當(dāng)前列腺癌患者出現(xiàn)排尿困難（如尿頻、排尿中斷、不能排尿）、狀時(shí)，病情多已進(jìn)展至晚期，出現(xiàn)了骨骼和其他部位轉(zhuǎn)移，，這時(shí)候則放療根治[34]。目前，轉(zhuǎn)移性前列腺癌仍是不可治愈的腫瘤。我國多中，在我國初診前列腺癌患者僅有約 1/3 為局限性病變，大部分前列腺即處于晚期階段，喪失了根治的機(jī)會(huì)。因此，對(duì)高危人群進(jìn)行篩查、是提高我國前列腺癌患者總體生存率最有效的手段。

預(yù)期壽命的最重要障礙[33, 35, 36]。造成癌癥死亡率逐年增加效的手段將抗癌藥物傳遞到腫瘤部位。系統(tǒng)性應(yīng)用抗癌藥的作用，往往造成嚴(yán)重的毒副作用[37, 38]。因此，靶向遞送制的有效手段。納米技術(shù)的快速發(fā)展為提高藥物在腫瘤部效果及減少藥物的毒副作用方面提供了有效的手段[39, 40]。具有許多獨(dú)特的性質(zhì)，例如納米級(jí)尺寸、高表面-體積比以且納米載體能夠調(diào)節(jié)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)，從而增物裝載到納米載體中能夠提高其在體內(nèi)的穩(wěn)定性、延長體控釋放[42]。因此，納米藥物制劑能夠改變藥物在體內(nèi)的生部位。各種基于有機(jī)、無機(jī)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)或聚糖的化合開發(fā)新的癌癥治療藥物（圖 1-2）。而這些載體有令人信服法。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2668272