【摘要】：目的:探究NPRL2在改善去勢抵抗型前列腺癌(CRPC)對奧拉帕尼敏感性的影響方法:Western Blot法檢測正常前列腺上皮細(xì)胞(RWPE-1)、前列腺癌細(xì)胞系(LNCaP)、前列腺癌細(xì)胞系(PC3)和耐恩雜魯胺的去勢抵抗型前列腺癌細(xì)胞(LNPER)中NPRL2的蛋白表達(dá)情況。通過慢病毒轉(zhuǎn)染到CRPC細(xì)胞建立NPRL2的過表達(dá)和干擾,實時熒光PCR和Western blot法驗證其NPRL2過表達(dá)和干擾效率。在體外實驗中為了解NPRL2在CRPC細(xì)胞中調(diào)控Olaparib的敏感性,通過CCK-8法檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和Transwell侵襲和遷移小室實驗檢測細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。此外,我們研究了過表達(dá)和沉默NPRL2影響凋亡相關(guān)蛋白(cleaved caspase-3蛋白、BAX蛋白和Bcl-2蛋白)、共濟失調(diào)毛細(xì)血管擴張突變基因(ataxia telangiectasia-mutated,ATM)蛋白和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相關(guān)蛋白(E-cadherin蛋白和vimentin蛋白)的表達(dá)。此外,我們進(jìn)行了體內(nèi)實驗,以驗證NPRL2在調(diào)節(jié)Olaparib敏感性中相關(guān)蛋白發(fā)生改變的結(jié)果。結(jié)果:NPRL2調(diào)控去勢抵抗型前列腺癌(CRPC)對Olaparib的敏感性;Western blot顯示NPRL2在RWPE-1細(xì)胞中低表達(dá)而在LNCaP、PC3和LNPER細(xì)胞中高表達(dá)并成功構(gòu)建過表達(dá)和干擾NPRL2的穩(wěn)定細(xì)胞株,QPCR及Western blot結(jié)果顯示慢病毒轉(zhuǎn)染能明顯增高和降低NPRL2的mRNA和蛋白水平。CCK8實驗表明NPRL2過表達(dá)促進(jìn)的CRPC細(xì)胞生長和對Olaparib抗性,沉默NPRL2抑制CRPC細(xì)胞增殖,增強對Olaparib的敏感性。流式細(xì)胞和Transwell實驗分別顯示,沉默NPRL2聯(lián)合Olaparib能明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡和阻止細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。Western blot結(jié)果表明沉默NPRL2聯(lián)合Olaparib處理后cleaved caspase-3、BAX蛋白、E-cadherin蛋白表達(dá)水平增高和Bcl-2蛋白、vimentin蛋白表達(dá)水平降低。沉默NPRL2能下調(diào)CRPC細(xì)胞的p-ATM和ATM蛋白表達(dá)水平,反之則上調(diào)p-ATM和ATM蛋白表達(dá)水平。體內(nèi)實驗結(jié)果證明Olaparib能顯著抑制沉默NPRL2后的PC3細(xì)胞的裸鼠皮下腫瘤生長,Western blot檢測顯示沉默NPRL2后,皮下腫瘤凋亡增加,DNA損傷增加。結(jié)論:沉默NPRL2能增強CRPC對Olaparib的敏感性,并且NPRL2可以作為潛在的治療靶標(biāo)并預(yù)測CRPC對Olaparib的抗性。
【圖文】：

圖 1. NPRL2 在 CRPC 細(xì)胞中表達(dá)與 ATM 蛋白表達(dá)的關(guān)系Fig 1. Expression of NPRL2 in CRPC cells and its relationship with ATM protein expressionHigher levels of NPRL2 expression in prostate cancer cells. NPRL2 promotes theproliferation of PCa cells and enhances the levels of phospho-ATM and ATM.A, The relativelevels of NPRL2 expression in RWPE-1, LNPER, PC3, and LNCaP cells were determined by

圖 2. CRPC 細(xì)胞中 NPRL2 的表達(dá)與 Olaparib 敏感性的關(guān)系和對細(xì)胞凋亡的影響Fig 2. Relationship between expression of NPRL2 and Olaparib sensitivity in CRPC cells andits effect on apoptosisNPRL2 enhances resistance to Olaparib, and NPRL2 silencing enhances Olaparib sensitivityby promoting CRPC cell apoptosis. A, L: LNPER, P: PC3.L-EV, L-sh, P-EV and P-sh were
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 韓博;戚美;譚薇薇;楊木易;;去勢抵抗性前列腺癌的發(fā)生發(fā)展機制及藥物治療新進(jìn)展[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2015年09期

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本文編號：2637756