發(fā)布時(shí)間：2020-04-02 00:31

【摘要】：目的:通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn),研究Necrostatin-1(Nec-1)是否能夠減輕高糖作用下大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞(Rat glomerular endothelial cells,RGECs)壞死性凋亡的發(fā)生,進(jìn)而減輕細(xì)胞死亡、炎癥反應(yīng),并探討其機(jī)制。方法:對RGECs進(jìn)行體外培養(yǎng),用凝血因子VIII鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞后,將其根據(jù)不同干預(yù)條件隨機(jī)分為以下四組:正常組(5.5mmol/L葡萄糖)、甘露醇組(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)、高糖組(30mmol/L葡萄糖)、高糖+Nec-1組(30mmol/L葡萄糖+100μmol/L Nec-1)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光檢測各組RIP1、RIP3和IL-6的蛋白表達(dá)定量及定位;采用Real-time PCR檢測各組RIP1、RIP1和IL-6的mRNA表達(dá)情況;采用蛋白印跡法(WB)檢測各組RIP1、RIP3和IL-6的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.培養(yǎng)的大鼠腎小球細(xì)胞胞漿內(nèi)可表達(dá)凝血因子VIII,鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞。2.免疫細(xì)胞化學(xué):RIP1、RIP3、IL-6主要在RGECs胞漿中表達(dá),高糖組的表達(dá)量明顯高于正常組和甘露醇組(P值均0.01),而高糖+Nec-1組較高糖組明顯減少(P0.01),其余組之間上述指標(biāo)的表達(dá)無差異(P0.05)。3.免疫熒光:RIP1、RIP3、IL-6主要在RGECs胞漿中表達(dá),且高糖組的熒光明顯強(qiáng)于正常組和甘露醇組,而高糖+Nec-1組熒光亮度明顯弱于高糖組,其余組之間無明顯亮度差異。4.實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Time polymerase chain reaction,RT-PCR):高糖環(huán)境下,RIP1、RIP3、IL-6的mRNA相對表達(dá)量明顯高于正常組及甘露醇組(P值均0.01),而在高糖+Nec-1組的表達(dá)較高糖組明顯減少(P0.01),其余組之間上述指標(biāo)的表達(dá)無差異(P0.05)。5.蛋白印跡法(Western Blot,WB):高糖環(huán)境下,RIP1、RIP3、IL-6的蛋白表達(dá)量明顯高于正常組和甘露醇組(P值均0.01),而高糖+Nec-1組的表達(dá)較高糖組明顯減少(P0.01),其余組之間上述指標(biāo)的表達(dá)無差異(P0.05)。結(jié)論:RGECs在高糖刺激下,發(fā)生壞死性凋亡明顯增多,進(jìn)而發(fā)生了較明顯的炎癥反應(yīng)和損傷,而使用了壞死性凋亡特異性阻斷劑Nec-1干預(yù)后,以上指標(biāo)的表達(dá)均下調(diào),說明Nec-1可能通過抑制壞死性凋亡途徑,從而減輕RGECs的炎癥反應(yīng)。
【圖文】：

2.1.1 細(xì)胞形態(tài)RGECs細(xì)胞成貼壁生長，密度較均勻，大致形態(tài)為梭形或橢圓形，胞漿飽滿，可見其中圓形細(xì)胞核，有時(shí)可見雙核。（見圖1）圖1 正常RGECs形態(tài)（×100）2.1.2 細(xì)胞鑒定熒光顯微鏡下可見DAPI將細(xì)胞核染成藍(lán)色，Ⅷ因子為綠色，重合后可見主要表達(dá)于RGECs胞漿中，，故細(xì)胞鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞，可見細(xì)胞形態(tài)為梭形或多邊形。（見圖2）DAPI Factor Ⅷ Merge圖2 Ⅷ因子熒光染色（×200）

2.1.2 細(xì)胞鑒定熒光顯微鏡下可見DAPI將細(xì)胞核染成藍(lán)色，Ⅷ因子為綠色，重合后可見主要表達(dá)于RGECs胞漿中，故細(xì)胞鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞，可見細(xì)胞形態(tài)為梭形或多邊形。（見圖2）DAPI Factor Ⅷ Merge圖2 Ⅷ因子熒光染色（×200）
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R587.2;R692.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 張立亞;崔堯麗;王兵;于金寶;王林林;王玉亮;王勇強(qiáng);;程序性壞死特異性抑制劑-1對創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟保護(hù)作用的研究[J];中華危重病急救醫(yī)學(xué);2014年01期

2 王亮;王曉j;張睫;田玨;王葉紅;郭勇;李曉宇;王英元;劉慧榮;;Necrostatin-1對大鼠慢性心肌缺血損傷的保護(hù)作用[J];中國心血管病研究;2008年07期

3 閆振成,賈昆霞,張建國,黃慶愿,朱妙珍,丁涵露;高糖對培養(yǎng)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞膜流動(dòng)性影響的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年06期

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1 鄭蘭;RIP1和RIP3在糖尿病腎病大鼠腎組織中的表達(dá)及意義[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2017年

2 張利;高糖環(huán)境對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞壞死性凋亡及IL-6表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

本文編號：2611179