【摘要】：目的:胰高血糖素樣肽(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一種腸肽類激素,GLP-1類藥物是近年研發(fā)的治療糖尿病新藥,7-36a是其天然存在形式,9-36a是其主要的代謝活性產(chǎn)物。GLP-1受體可在腎臟表達(dá),GLP-1可通過(guò)激活受體發(fā)揮保護(hù)腎臟作用,而其代謝產(chǎn)物對(duì)腎臟是否有保護(hù)作用以及通過(guò)何種途徑起作用,目前并不明確。本研究旨在通過(guò)觀察分別給予足細(xì)胞高糖、炎癥因子刺激后,其自噬活性和凋亡水平是否受影響,來(lái)探討GLP-1,7-36a及其代謝產(chǎn)物9-36a對(duì)足細(xì)胞自噬及凋亡的作用及機(jī)制,為糖尿病腎病的防治提供新思路。方法:將體外培養(yǎng)的人腎臟足細(xì)胞分為NC組、HG組、HG+9-36a組、HG+7-36a組、TNF-α組、TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組。第一部分研究:將加入處理因素24小時(shí)后的各組細(xì)胞提取蛋白并測(cè)定濃度,用Western Blotting檢測(cè)各組自噬相關(guān)蛋白mTOR、Phospho-mTOR、Beclin1、LC3、ATG5、ATG 16L1,比較各組蛋白表達(dá)差異,應(yīng)用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。第二部分研究:將加入處理因素48小時(shí)后的各組細(xì)胞用TUNEL法檢測(cè)其凋亡情況,從每個(gè)樣本取5個(gè)視野,統(tǒng)計(jì)紅色熒光標(biāo)記的細(xì)胞個(gè)數(shù)占該視野所有細(xì)胞個(gè)數(shù)的百分比作為凋亡細(xì)胞百分率,應(yīng)用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:第一部分研究:1、GLP-1,7-36a及9-36a對(duì)高糖處理足細(xì)胞的影響(1)與NC組相比,HG組LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表達(dá)量增多(P0.05),而HG+9-36a組、HG+7-36a組LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表達(dá)量無(wú)明顯變化(P0.05);與HG組相比,HG+9-36a組、HG+7-36a組LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表達(dá)量減少(P0.05);HG+9-36a組和HG+7-36a組相比較,LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表達(dá)量無(wú)明顯變化(P0.05);(2)與NC組相比,HG組、HG+9-36a組、HG+7-36a組ATG 5的表達(dá)量均增多(P0.05);與HG組相比,HG+9-36a組、HG+7-36a組ATG 5的表達(dá)量均無(wú)明顯變化(P0.05);(3)與NC組相比,HG組、HG+9-36a組、HG+7-36a組ATG 16L1的表達(dá)量均無(wú)明顯變化(P0.05);2、GLP-1,7-36a及9-36a對(duì)TNFα處理足細(xì)胞的影響(1)與NC組相比,TNF-α組LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表達(dá)量增多(P0.05),而TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組LC3、Beclin1及Phospho-mTOR表達(dá)量無(wú)明顯變化(P0.05);與TNF-α組相比,TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表達(dá)量減少(P0.05);TNF-α+9-36a組和TNF-α+7-36a組相比較,LC3、Beclin1及Phospho-mTOR的表達(dá)量無(wú)明顯變化(P0.05);(2)與NC組相比,TNF-α組、TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組ATG 5的表達(dá)量均增多(P0.05);與TNF-α組相比,TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組ATG 5的表達(dá)量均無(wú)明顯變化(P0.05);(3)與NC組相比,TNF-α組、TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組ATG 16L1的表達(dá)量均無(wú)明顯變化(P0.05);第二部分研究:(1)與NC組相比,NC(+)組、HG組凋亡細(xì)胞百分率均升高(P0.05),與NC(+)組相比,NC組、HG組、HG+9-36a組、HG+7-36a組凋亡細(xì)胞百分率降低(P0.05);與HG組相比,HG+9-36a組、HG+7-36a組凋亡細(xì)胞百分率降低(P0.05);(2)與NC組相比,NC(+)組、TNF-α組凋亡細(xì)胞百分率均升高(P0.05),與NC(+)組相比,NC組、TNF-α組、TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組凋亡細(xì)胞百分率降低(P0.05);與TNF-α組相比,TNF-α+9-36a組、TNF-α+7-36a組凋亡細(xì)胞百分率降低(P0.05)。結(jié)論:(1)高糖和TNF-α可以激活足細(xì)胞自噬,并誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡。(2)GLP-1,7-36a及其代謝產(chǎn)物9-36a可以抑制高糖與炎癥因子誘導(dǎo)的足細(xì)胞自噬,并減少足細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

圖 1 高糖處理的足細(xì)胞 LC3 的表達(dá)情況注：* 與 NC 組比較 P＜0.0.5，## 與 HG 組比較 P＜0.05.2 Beclin1 的表達(dá)情況

圖 2 高糖處理的足細(xì)胞 Beclin1 的表達(dá)情況注：* 與 NC 組比較 P＜0.0.5，，## 與 HG 組比較 P＜0.05 ATG 5 的表達(dá)情況
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9

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本文編號(hào)：2601236