【摘要】：背景:臨床上常將人工蟲草多糖作為腎病綜合征的輔助藥。采用阿霉素建立SD大鼠腎病綜合征模型是經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)性腎病綜合征模型之一,該模型的臨床表現(xiàn)及病理變化均類似于人類微小病變腎病。目的:觀察人工蟲草多糖與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腎病綜合征大鼠腎功能及凝血的影響。方法:體外培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備細(xì)胞懸液,并對(duì)懸液進(jìn)行PKH26標(biāo)記。50只SD大鼠隨機(jī)取10只為正常組(不予任何處理),余40只SD大鼠靜脈注射阿霉素建立阿霉素腎病大鼠模型,隨機(jī)均分為4組,模型組不作處理;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組尾部靜脈注射脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞連續(xù)3 d;人工蟲草多糖組灌胃人工蟲草多糖連續(xù)12周;聯(lián)合組連續(xù)3 d尾靜脈注射干細(xì)胞,同時(shí)灌胃人工蟲草多糖連續(xù)12周。實(shí)驗(yàn)12周測(cè)定各組大鼠24 h尿蛋白定量、血清血脂指標(biāo)、肌酐、尿素氮及凝血指標(biāo)變化;光鏡下觀察雙腎組織病理學(xué)變化;熒光顯微鏡觀測(cè)PKH26標(biāo)記的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞存活及分布情況,采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)腎組織中Hpa基因表達(dá)情況。結(jié)果與結(jié)論:(1)檢測(cè)指標(biāo):脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組、人工蟲草多糖組及聯(lián)合組的24 h尿蛋白定量及血清總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平均明顯低于模型組(P0.05),而血清總蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平則明顯高于模型組(P0.05)。聯(lián)合組各項(xiàng)指標(biāo)與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組及人工蟲草多糖組比較,差異有顯著性意義(P0.05);(2)血液高凝狀態(tài):脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組、人工蟲草多糖組大鼠的血液高凝狀態(tài)較模型組明顯緩解,聯(lián)合組進(jìn)一步緩解(P0.05);(3)雙腎組織病理變化:聯(lián)合組的雙腎組織病理改善情況明顯優(yōu)于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組和人工蟲草多糖組,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組和人工蟲草多糖組較模型組稍有改善,但不及聯(lián)合組;(4)熒光顯微鏡觀測(cè)PKH26標(biāo)記的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞:聯(lián)合組多于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組及人工蟲草多糖組;(5)Hpa基因表達(dá):模型組較正常組明顯增加,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組、人工蟲草多糖組較模型組減少,聯(lián)合組明顯減少(P0.05);(6)結(jié)果提示,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合人工蟲草多糖能夠改善腎病綜合征大鼠的腎功能及血液高凝狀態(tài),減輕腎組織的病理學(xué)損害。
【圖文】：

±s，，n=10)Table3Comparisonofcoagulationtestresultsamonggroups表注：與正常組比較，aP<0.05；與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組及人工蟲草多糖組比較，bP<0.05。組別凝血酶原時(shí)間(s)凝血酶時(shí)間(s)活化部分凝血活酶時(shí)間(s)正常組模型組脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組人工蟲草多糖組聯(lián)合組6.47±0.5820.45±1.36ab16.34±1.2414.25±1.308.50±0.87b6.62±0.4728.93±1.65ab19.67±1.4216.24±1.2310.04±0.92b6.68±0.6133.64±1.76ab25.47±1.4220.33±1.2116.27±0.81b圖1體外培養(yǎng)傳第3代的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)(倒置顯微鏡，×200)Figure1Invitrocultureofadipose-derivedmesenchymalstemcellsatpassage3(invertedmicroscope,×200)圖2各組大鼠凝血指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較Figure2Comparisonofcoagulationtestresultsamonggroups圖注：與正常組比較，aP<0.05；與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組及人工蟲草多糖組比較，bP<0.05。403020100血指標(biāo)凝s)(凝血酶原時(shí)間凝血酶時(shí)間活化部分凝血活酶時(shí)間abababbbb正常組模型組脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組人工蟲草多糖組聯(lián)合組

質(zhì)干細(xì)胞組、人工蟲草多糖組及聯(lián)合組的24h尿蛋白定量及血清總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮均明顯低于模型組，聯(lián)合組又明顯低于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組及人工蟲草多糖組，而血清總蛋白、白蛋白和高密度脂蛋白的比較在脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組、人工蟲草多糖組及聯(lián)合組則明顯高于模型組，聯(lián)合組各項(xiàng)指標(biāo)與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組及人工蟲草多糖組比較，差異有顯著性意義�？赏茰y(cè)出脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞及人工蟲草多糖具有減少蛋白尿、調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用。其可能通過(guò)提高整體能量與物質(zhì)代謝，ABCDE圖3各組大鼠的腎組織病理學(xué)變化(蘇木精-伊紅染色，×400)Figure3Pathologicalchangesofthekidneytissuesofratsineachgroup(hematoxylin-eosinstaining,×400)圖注：圖A為正常組，顯示正常腎小管結(jié)構(gòu)；B為模型組，顯示腎小管結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重；C為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組，顯示少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；D為人工蟲草多糖組，顯示炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及水腫程度均減輕；E為聯(lián)合組，顯示腎小管各種病理病變明顯減輕。ABCDE圖4PKH26標(biāo)記的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)(×200)Figure4MorphologicalobservationofPKH26-labeledadipose-derivedmesenchymalstemcells(×200)圖注：圖A為正常組：無(wú)表達(dá)；B為模型組：可見(jiàn)少量紅色標(biāo)記的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；C為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組，可見(jiàn)紅色標(biāo)記的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；D為人工蟲草多糖組，可見(jiàn)紅色標(biāo)記的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞；E為聯(lián)合組，可見(jiàn)較多紅色標(biāo)記的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。圖5各組大鼠Hpa基因表達(dá)Figure5ExpressionofHpageneinrats圖注：圖A為各組大鼠Hpa基因電泳表達(dá)；B為各組大鼠Hpa基因表達(dá)柱形圖。與正常組比較，aP<0.05；與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組及人工蟲草多糖組比較，bP<0.05。正常組模型組聯(lián)合組脂肪間充?

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