【摘要】：目的:觀察蛋白酶體抑制劑MG132對(duì)高糖培養(yǎng)條件下腎小管上皮細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄共抑制因子Sno N蛋白表達(dá)的影響,探討MG132減輕高糖狀態(tài)下腎小管纖維化病變的作用及可能機(jī)制。方法:將體外培養(yǎng)的NRK-52E細(xì)胞分為正常組(NG)、高糖組(HG)和不同濃度MG132預(yù)處理后高糖培養(yǎng)組(HG+MG132),采用免疫熒光雙染的方法觀察E-鈣黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)在腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)和分布,用Western blotting方法檢測(cè)Sno N、Samd泛素化調(diào)節(jié)因子2(Smurf2)、Arkadia、E-cadherin、α-SMA和Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)等目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:與NG組相比,HG組腎小管上皮細(xì)胞E-cadherin和Sno N表達(dá)減少(P0.05),而α-SMA、Col-Ⅰ、Smurf2和Arkadia表達(dá)增多(P0.05);與HG組相比,不同濃度MG132預(yù)處理腎小管上皮細(xì)胞后高糖培養(yǎng),可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞中Sno N和E-cadherin蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05),而α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05),并且這種效應(yīng)呈量效依賴性,但MG132預(yù)處理對(duì)Smurf2和Arkadia的表達(dá)無(wú)影響。結(jié)論:MG132可對(duì)抗高糖介導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞的纖維化效應(yīng),其機(jī)制可能是通過(guò)減少Sno N蛋白的泛素化降解作用實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

Figure1．ImmunofluorescencestainingofE-cadherinandα-SMAinNＲK-52Ecellsafter48hincubatedwithhighconcentrationofglucose(×200)．DAPIstaining(blue)representscellnucleus．圖1高糖處理48h后E-cadherin和α-SMA在NＲK-52E細(xì)胞的表達(dá)2MG132對(duì)NＲK-52E細(xì)胞SnoN蛋白表達(dá)的影響與NG組相比，HG組NＲK-52E細(xì)胞中的SnoN蛋白表達(dá)顯著減少(P＜0.05);而隨著MG132預(yù)處理濃度的增高，HG+MG132組的SnoN蛋白表達(dá)較HG組逐漸增多，差異顯著(P＜0.05)，并呈劑量依賴性，見(jiàn)圖2。Figure2．TheeffectsofMG132ontheproteinexpressionofSnoNinNＲK-52Ecellsunderdifferentconditions．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vsNGgroup;△P＜0.05vsHGgroup;#P＜0.05vs5μmol/LMG132+HGgroup．圖2MG132對(duì)高糖培養(yǎng)NＲK-52E細(xì)胞SnoN蛋白表達(dá)的影響3MG132對(duì)高糖培養(yǎng)NＲK-52E細(xì)胞Smurf2和Arkadia蛋白表達(dá)的影響HG組NＲK-52E細(xì)胞中的Smurf2和Arkadia蛋白表達(dá)較NG組顯著增多，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而MG132預(yù)處理對(duì)高糖環(huán)境培養(yǎng)的NＲK-52E細(xì)胞中的Smurf2和Arkadia蛋白表達(dá)沒(méi)有影響，見(jiàn)圖3。Figure3．TheeffectsofMG132ontheproteinexpressionofSmurf2andArkadiainNＲK-52Ecellsincubatedun-derdifferentconditions．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vsNGgroup．圖3MG132對(duì)高糖培養(yǎng)NＲK-52E細(xì)胞Smurf2及Arkadia蛋白表達(dá)的影響·66·

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