【摘要】：目的:初步探究低劑量銻暴露的類(lèi)雄激素樣作用,并探究其作用機(jī)制。方法:首先篩選出銻促進(jìn)LNCaP細(xì)胞增殖的最適濃度,然后在去雄激素的條件下用銻、雄激素分別處理LNCaP細(xì)胞,再通過(guò)采用CCK-8和Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證銻是否有類(lèi)似于雄激素促進(jìn)LNCaP細(xì)胞增殖、侵襲的效應(yīng);將銻和雄激素拮抗劑康士得同時(shí)處理LNCaP細(xì)胞,觀察上述增殖和侵襲增加的效應(yīng)是否降低或消失,由此明確銻有無(wú)類(lèi)雄激素效應(yīng);用銻處理LNCaP細(xì)胞,采用RT-q PCR及Western Blot方法分別檢測(cè)銻處理后LNCaP細(xì)胞的AR蛋白及AR m RNA的表達(dá)的影響;通過(guò)采用RT-q PCR方法檢測(cè)銻處理后AR下游調(diào)控基因PSA及NKX3.1m RNA表達(dá)的影響,明確銻是否增加AR的轉(zhuǎn)錄活性水平;通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)不同濃度狀態(tài)下低劑量銻暴露對(duì)AR磷酸化水平表達(dá)的影響,初步探究銻的類(lèi)雄激素效應(yīng)的機(jī)制。結(jié)果:在去雄激素的完全培養(yǎng)基條件下,LNCaP細(xì)胞幾乎不增殖。低劑量的銻暴露可以促進(jìn)LNCaP細(xì)胞增殖,并且以0.5u M濃度狀態(tài)下的銻暴露促進(jìn)增殖效應(yīng)最為明顯,與雄激素有類(lèi)似促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用(P0.05),而其增殖效應(yīng)均可被雄激素拮抗劑所拮抗,因此認(rèn)為重金屬銻具有類(lèi)雄激素效應(yīng),且其作用的位點(diǎn)是AR;Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示銻暴露和雄激素可以增強(qiáng)LNCaP細(xì)胞的侵襲能力(P0.05),且其均可被雄激素拮抗劑所拮抗,再次證實(shí)重金屬銻具有類(lèi)雄激素效應(yīng);Western Blot和RT-q PCR方法結(jié)果提示銻暴露對(duì)AR蛋白和m RNA水平的表達(dá)無(wú)明顯影響。RT-q PCR結(jié)果顯示低劑量銻暴露可以促進(jìn)AR下游靶基因PSA、NKX3.1的m RNA水平的表達(dá),且其效應(yīng)均可被雄激素拮抗劑拮抗,說(shuō)明銻暴露雖然對(duì)AR蛋白和m RNA水平表達(dá)無(wú)明顯影響,卻可以提高AR的轉(zhuǎn)錄活性水平。Western Blot結(jié)果表明在一定范圍內(nèi),隨著銻濃度的升高AR磷酸化水平也升高,由此說(shuō)明銻可以通過(guò)磷酸化修飾來(lái)發(fā)揮類(lèi)雄激素的效應(yīng)。結(jié)論:低劑量銻暴露具有類(lèi)雄激素效應(yīng),且這種效應(yīng)可以被雄激素拮抗劑所阻斷;銻的類(lèi)雄激素效應(yīng)是通過(guò)使AR發(fā)生磷酸化修飾作用來(lái)增加AR的轉(zhuǎn)化活性,進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展。
【圖文】：

細(xì)胞的增殖效應(yīng)幾乎被完全抑制。因此低劑量的銻暴露可以促進(jìn) LNCaP 細(xì)胞增殖。并且當(dāng)銻的濃度為 0.5uM 時(shí)促進(jìn)細(xì)胞的增殖效應(yīng)最大。圖1 將LNCaP細(xì)胞接種在96孔板內(nèi)，用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的密度至70%左右，換無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞處理24h,然后再將含有不同濃度的銻的去激素培養(yǎng)基培養(yǎng)24h、72h后用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的活性，繪制不同時(shí)間的細(xì)胞增殖曲線(xiàn)。結(jié)果表示三次實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在培養(yǎng)72h后，，DHT處理的LNCaP細(xì)胞數(shù)目增加了4倍(P<0.05)。Sb處理72h后LNCaP細(xì)胞數(shù)目增加了2.5倍(P<0.05)，且這種增殖效應(yīng)能夠被雄激素拮抗劑康士得所拮抗(P<0.05)，見(jiàn)圖2；由于康士得特異性競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合AR，因此說(shuō)明重金屬銻具有類(lèi)雄激素的效應(yīng)，且其作用位點(diǎn)為AR。圖2 將LNCaP細(xì)胞接種在96孔板內(nèi)，用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的密度至70%左右，換無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞處理24h，然后添加相應(yīng)含有雙氫睪酮、銻、康士得的去激素完全培養(yǎng)基，再繼續(xù)培養(yǎng)72h后用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的活性。結(jié)果表示三次實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。＊P<0.05。Sb：銻；DHT：雙氫睪酮；Cas：康士得。2.3 銻對(duì)LNCaP細(xì)胞侵襲作用具有類(lèi)雄激素效應(yīng)將LNCaP細(xì)胞分別在含有空白對(duì)照、0.5uMSb、1nMDHT、1uMCas及Sb+Cas的去激素培養(yǎng)基處理48h，然后將各組處理后添加到Transwel小室內(nèi)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 韓蘇軍;張思維;陳萬(wàn)青;李長(zhǎng)嶺;;中國(guó)前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流行趨勢(shì)分析[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2013年04期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 周巧巧;重金屬的雌激素樣效應(yīng)及其機(jī)制研究[D];華中師范大學(xué);2010年

2 王亞?wèn)|;汞、鉻和錳化合物雌激素樣作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2003年

本文編號(hào)：2576783