發(fā)布時(shí)間：2019-10-18 20:04

【摘要】：目的研究長(zhǎng)鏈非編碼RNA PTENP1在人腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)及調(diào)控,并進(jìn)一步探索其功能及分子機(jī)制。 方法運(yùn)用lncRNAs芯片技術(shù)及qTR-PCR方法初步分析lncRNAs在人腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)譜。用qRT-PCR檢測(cè)PTENP1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)情況。通過甲基化特異性PCR分析PTENP1基因甲基化狀態(tài)。通過細(xì)胞增殖、遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)和腫瘤異體移植實(shí)驗(yàn)探索PTENP1的功能。通過Western blot檢測(cè)PTENP1對(duì)PTEN表達(dá)的影響,利用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證miR-21對(duì)PTENP1及PTEN的靶向作用。利用過表達(dá)及共表達(dá)方法,探索mir-21及PTEN在腎透明細(xì)胞癌中的功能及miR-21及PTEN對(duì)PTENP1在腎透明細(xì)胞癌中功能的影響并分析相互作用關(guān)系。 結(jié)果在腎透明細(xì)胞癌組織中可以檢測(cè)到大量的lncRNAs,其中數(shù)百種lncRNAs在腎癌中均存在異常表達(dá)。PTENP1在腎透明細(xì)胞癌中低表達(dá),其基因DNA存在甲基化。PTENP1和PTEN能夠抑制腎透明細(xì)胞癌增殖、遷徙及腫瘤轉(zhuǎn)移。PTENP1及PTEN的表達(dá)正相關(guān),PTENP1能夠增加PTEN的表達(dá)。在腎透明細(xì)胞癌中miR-21能夠靶向作用PTENP1及PTEN。MiR-21在腎透明細(xì)胞癌中具有促癌功能。在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN和SN12-PM6中mir-21能夠抑制PTENP1的抑癌功能。 結(jié)論P(yáng)TENP1在人腎透明細(xì)胞癌中低表達(dá)并與基因甲基化有關(guān)。腎透明細(xì)胞癌中PTENP1是抑癌基因,作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA (competing endogenous RNA)通過競(jìng)爭(zhēng)miR-21影響抑癌基因PTEN的表達(dá)可能是其發(fā)揮抑癌功能的分子機(jī)制。
【圖文】：

圖3各芯片數(shù)據(jù)的箱型圖。箱型圖能放映芯片數(shù)據(jù)的總體分布，圖中每個(gè)矩形盒的兩端邊的位置分別對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)批中表達(dá)水平處于上下四分位數(shù)的IncRNA的表達(dá)強(qiáng)度，矩形盒內(nèi)部直線代表表達(dá)水平處于中位數(shù)的IncRNA的表達(dá)強(qiáng)度，從圖中可初步看出各組數(shù)據(jù)的分布是類似的，這放映了樣本及芯片檢測(cè)過程質(zhì)量良好。22

結(jié)果與芯片結(jié)果有良好的一致性，同時(shí)提示芯片檢測(cè)結(jié)果較為可信以及差異性表達(dá)的普遍性存在（圖6)。在更大量的樣本驗(yàn)證數(shù)據(jù)提示，在同樣類型的不同組織樣品中上述IncRNAs的表達(dá)存在一定的變異性，但是在癌與癌旁組織仍有明顯的具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異（圖7)。同時(shí)我們也在部分組織中初步驗(yàn)證了部分已報(bào)道的在其他癌癥中異常表的IncRNAs在腎透明細(xì)胞的表達(dá)情況（表4)。初步分析提示在其他腫瘤異常表達(dá)的IncRNAs可能為IncRNAs在腎透明細(xì)胞癌中的研究提供線索。10I ■gene chipr L / /|i// pp6 / “ T-8 J圖 6 用 RT-qPCR 在六對(duì)組織中檢測(cè) IncRNA ENST00000456816，X91348，BC029135及NR—024418在癌組織中相對(duì)癌旁組織表達(dá)情況與芯片結(jié)果的比較。從圖中可以看出雖然兩者該的程度不一致，但上調(diào)及下調(diào)的趨勢(shì)是一致的，因?yàn)闄z測(cè)方法的差異，這也足以說明兩者結(jié)果相符，，芯片檢測(cè)較為可靠。26
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2551249