發(fā)布時間：2019-10-09 01:43

【摘要】：目的:使用小干擾RNA(siRNA)抑制人前列腺癌LNCa P細胞中婆羅雙樹樣基因4(SALL4)的表達并對抑制效果進行測定,檢測沉默(SALL4)后LNCa P細胞增殖、集落形成及凋亡等生物學(xué)行為的變化。方法:培養(yǎng)LNCa P細胞,分為si-SALL4組、陰性對照組與空白對照組。Real-time PCR與Western blotting技術(shù)檢測SALL4 mRNA與蛋白水平。采用MTS比色法觀察各組細胞增殖能力的變化,采用集落形成實驗觀察各組細胞集落形成能力的變化,流式細胞術(shù)研究SALL4對細胞凋亡的影響,利用Western blotting方法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2的表達情況。結(jié)果:與陰性對照組相比,si-SALL4組SALL4 mRNA和蛋白表達水平、細胞增殖能力、細胞集落形成能力均明顯降低(P0.05),而凋亡細胞明顯增加(P0.05),Bcl-2的表達減弱,而Bax的表達增強。結(jié)論:通過siRNA技術(shù)沉默(SALL4)表達可抑制前列腺癌LNCa P細胞增殖和集落形成能力,促進細胞凋亡,其促進凋亡作用可能與Bcl-2及Bax表達有關(guān)。
【圖文】：

Figure4．DetectionofapoptoticratebyflowcytometryaftertransfectionofSALL4siＲNAinLNCaPcells．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vsnegativecontrol．圖4流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染SALL4siＲNA對細胞凋亡的影響6si-SALL4下調(diào)Bcl-2蛋白的表達，上調(diào)Bax蛋白的表達Westernblotting結(jié)果顯示，與陰性對照組相比，si-SALL4組中LNCaP細胞的抗凋亡蛋白Bcl-2的表達明顯下調(diào)(P＜0.05)，而促凋亡蛋白Bax的表達量明顯上調(diào)(P＜0.05)，見圖5。討論在歐美國家，前列腺癌是一種老年男性常見疾病，其發(fā)病率僅次于肺癌，居第2位。流行病學(xué)顯示，前列腺癌在我國的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢，已列為男性泌尿系統(tǒng)腫瘤的第3位［9］，但發(fā)病機制尚不明確。研究表明，腫瘤不受控制的增殖能力與抵抗細胞凋亡能力是惡性腫瘤的兩大標志之一［10］，但是調(diào)控腫瘤細胞增殖與抗凋亡功能的機制尚未明確。SALL4基因在維持胚胎器官的分化與發(fā)育中發(fā)揮著重要的作用，是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子和干性因子。在人類中，，SALL4的缺失或突變與多種疾病相關(guān)，包括acro-renal-ocular綜合征、Okihiro綜合征和IVIC綜合征，這些疾病均以多器官畸形為特征，如耳畸形、聽力喪失以及腎臟、心臟和肢體等臟器的缺陷等。近年來研究表明SALL4蛋白在許多惡性腫瘤中高表達，其功能可能在調(diào)節(jié)腫瘤細胞特別是腫瘤干細胞的增殖與凋亡當(dāng)中發(fā)揮著重要的作用。SALL4過表達于不同的惡性腫瘤，在結(jié)直腸癌中，大約90%的腫瘤標本有SALL4過表達，并且與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度密切相關(guān)［11］，在乳腺癌中也有86.1%的腫瘤SALL4表達增高，甚至在腫瘤的早期就可以Figure5．TheeffectofSALL4siＲNAontheexpressionofBaxandBcl-2proteinsinLNCaPcells．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vsnegativecontrol

本文編號：2546537