【摘要】：目的:探討香煙煙霧對(duì)小鼠骨髓、外周血和腫瘤內(nèi)中性粒細(xì)胞(PMNs)功能和表達(dá)譜影響。方法:實(shí)驗(yàn)分為荷瘤和無(wú)瘤的香煙煙霧暴露組、無(wú)暴露對(duì)照組,共4組,10只/組;將小鼠膀胱癌細(xì)胞株MB49接種于4-5周齡同源C57BL/6J雌性小鼠。暴露組于腫瘤接種前2w開(kāi)始接受香煙(CS)暴露,1次/d,持續(xù)4w;無(wú)CS組暴露于空氣做對(duì)照。之后分別進(jìn)行:1.探討香煙煙霧對(duì)小鼠生長(zhǎng)及對(duì)膀胱原位種植瘤發(fā)生、發(fā)展的影響。2.同時(shí)提取小鼠血、骨髓、腫瘤PMNs,RNA-seq測(cè)序,分別對(duì)比小鼠各部位PMNs在CS暴露與非暴露組間的差異,荷瘤與無(wú)瘤組的差異,對(duì)差異基因進(jìn)行聚類(lèi)、功能和Pathway分析,初步了解吸煙對(duì)荷瘤鼠各階段PMN的表達(dá)影響及其中腫瘤因素的影響;綜合對(duì)比后,對(duì)以上篩選的與中性粒細(xì)胞促腫瘤表型相關(guān)的2倍及以上差異表達(dá)基因,設(shè)計(jì)引物,進(jìn)行Real time RT-PCR相對(duì)定量分析基因表達(dá),對(duì)這些有意義的功能基因在轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平上進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:1.香煙煙霧暴露的荷瘤組中有3例肺轉(zhuǎn)移,其中1例伴肝轉(zhuǎn)移,非暴露荷瘤組僅1例肺轉(zhuǎn)移;吸煙荷瘤組腫瘤重量顯著大于非吸煙荷瘤組(P0.05)。荷瘤組小鼠脾臟顯著大于非荷瘤組(P0.05),病理顯示有充血和增殖。無(wú)瘤吸煙組體重較無(wú)瘤非吸煙組顯著降低(P0.05),其脾臟重量也顯著降低(P0.05),病理顯示脾小體萎縮。2.小鼠PMNs經(jīng)表達(dá)譜測(cè)序及差異基因?qū)Ρ确治霭l(fā)現(xiàn),從中性粒細(xì)胞在骨髓發(fā)育時(shí)起吸煙和腫瘤因素就開(kāi)始影響中性粒細(xì)胞的表達(dá),主要為腫瘤相關(guān)信號(hào)通路、谷胱甘肽代謝途徑、Cytokine-cytokine receptor interaction信號(hào)通路、C hemokine signaling pathway信號(hào)通路和Focal adhesion信號(hào)通路等在香煙刺激的中性粒細(xì)胞的免疫作用中起到重要作用,以上通路中中性粒細(xì)胞腫瘤表型相關(guān)的關(guān)鍵基因MMP9、Bv8、VEGF、CCL2、TRAIL、MMP8等也出現(xiàn)在荷瘤組與無(wú)瘤組的差異中,經(jīng)Real time RT-PCR驗(yàn)證表達(dá)水平上的驗(yàn)證均發(fā)生明顯的表達(dá)上調(diào)或下調(diào)。結(jié)論:吸煙能促小鼠腫瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展,香煙暴露能夠促進(jìn)骨髓中性粒細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)的基因,影響外周血或腫瘤內(nèi)中性粒細(xì)胞表達(dá)與自身運(yùn)動(dòng),趨化、氧化爆發(fā),粘附以及促腫瘤免疫相關(guān)的基因。吸煙不僅直接影響與腫瘤相關(guān)的途徑,而且在與腫瘤因素的合力下對(duì)腫瘤進(jìn)展相關(guān)的基因和信號(hào)通路有作用;吸煙和腫瘤對(duì)中性粒細(xì)胞在發(fā)育和成熟期,及功能期階段均有轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響。這可能是調(diào)控腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞由N1型抗腫瘤表型向N2型促腫瘤表型轉(zhuǎn)變的重要因素。
【圖文】：

圖 1.04） 觀察和處置（1）一般情況觀察記錄每天煙草煙霧暴露前后觀察小鼠一般狀況，記錄每天體重，每 2-3d 血尿試紙和手觸檢測(cè)小鼠膀胱成瘤情況和腫瘤生長(zhǎng)情況。初步比較煙草煙霧暴露的荷瘤小鼠與無(wú)暴露組的成瘤和腫瘤生長(zhǎng)情況。（2）病理檢測(cè)根據(jù)煙草毒物在吸煙 6-8h內(nèi)升高，12-16h恢復(fù)正常。在吸煙末次暴露后 6h，麻醉狀態(tài)下收集小鼠抗凝外周全血，斷頸處死后無(wú)菌取腫瘤、股骨和脛骨，預(yù)冷 PBS 沖洗骨髓并收集沖洗液，詳見(jiàn)下。分別分離小鼠的肝臟、脾臟、腎臟、肺等重要臟器，稱(chēng)重之后標(biāo)本進(jìn)行 10%福爾馬林固定，石蠟包埋后制作組織切片，70℃烤箱中烤 1 小時(shí)，備用。切片

吸煙組和種瘤吸煙組，各組差異顯著性見(jiàn)圖 1.1（Tu+為荷瘤處理，，Tu-為無(wú)瘤照；CS+為吸煙處理，CS-為無(wú)煙對(duì)照；*為 P<0.05）。圖 1.1 各組小鼠處死前體重比較 圖 1.2 小鼠血尿監(jiān)測(cè)膀胱成瘤情況2．成瘤及轉(zhuǎn)移情況：生長(zhǎng)過(guò)程中檢測(cè)血尿（圖 1.2）和體外觸摸，及處死后膀胱病理檢測(cè)發(fā)現(xiàn)原位種植膀胱癌細(xì)胞的兩組雖成瘤率無(wú)差異，均為 8/10 只，但吸煙組（CS）瘤體積和重量顯著大于非吸煙組（no CS）（P <0.05），且吸煙組有 3 例肺轉(zhuǎn)移其中 1 例同時(shí)伴肝轉(zhuǎn)移，非吸煙組 1 例肺轉(zhuǎn)移。如圖 1.3 所示****Tu + + - -CS - + + -吸煙
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R737.14

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本文編號(hào)：2546429