【摘要】：目的 目前國內(nèi)外研究證實(shí)microRNAs異常表達(dá)與腫瘤發(fā)生和實(shí)性腫物的進(jìn)展有關(guān),miR-200s決定著腫瘤細(xì)胞的上皮表型并控制著腫瘤的侵襲性和遷移性。與傳統(tǒng)的從組織中獲取microRNAs相比,外周血中獲取nicroRNAs,具有更加微創(chuàng),減輕取樣過程中病人的疼痛和術(shù)后反應(yīng),大大縮短臨床采集樣本的時(shí)間,可同時(shí)得出多項(xiàng)與疾病有關(guān)的參數(shù)以及可反復(fù)操作、動(dòng)態(tài)監(jiān)測等優(yōu)點(diǎn)。因此,我們假設(shè)定量檢測外周血中1niR-200s中具有上皮特性的nicroRNAs,可能作為膀胱癌一種有效的生物標(biāo)志物。 方法 搜集國內(nèi)外文獻(xiàn)證實(shí),：niR-200s中1niR-200c在膀胱癌和健康人群的膀胱組織中具有明顯差異,可作為膀胱癌診斷,惡性程度評估及預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)共包含75例研究對象,所有研究對象均已了解外周血樣本采集意義并簽署知情同意書。實(shí)驗(yàn)組為膀胱移行細(xì)胞癌患者,無其它腫瘤病史,共58例；對照組為隨機(jī)健康體檢者17例。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)為膀胱移行細(xì)胞癌。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的分化程度,按照WHO2004分級,分為：低度惡性傾向尿路上皮乳頭狀瘤(Papillary urothelial neoplasms of low malignant potential, PUNLMP)、乳頭狀尿路上皮癌低分級、乳頭狀尿路上皮癌高分級三個(gè)級別。按照國際抗癌聯(lián)盟(UICC)2009年第7版TNM分期法對膀胱癌進(jìn)行分期,分為Tis原位癌、Ta非浸潤性乳頭狀癌、T1腫瘤侵及上皮下結(jié)締組織、T2腫瘤侵犯肌層、T3腫瘤侵犯膀胱周圍組織、T4侵犯以下任一器官或組織,如前列腺、子宮、陰道、盆壁和腹壁。非浸潤性膀胱癌包括Tis、Ta、T1,浸潤性膀胱癌包括T2、T3、T4。對照組將有明確膀胱癌或腫瘤家族史、腺性增生性膀胱炎、前列腺特異抗原(PSA)大于4.0ng/ml的前列腺增生患者、甲胎蛋白(AFP)大于400mg/ml、癌胚抗原(CEA)大于15.0ug/L等患者排除。同時(shí)收集58例實(shí)驗(yàn)組中30例患者的組織樣本,包括腫物和正常黏膜組織,組織樣本獲取前經(jīng)患者同意并再次簽署知情同意書。收集實(shí)驗(yàn)對象的臨床病理資料,包括性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、TNM分期、分級情況等,并以單因素方差分析或獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),檢驗(yàn)miR-200c相對表達(dá)水平與各臨床病理因素之間的相關(guān)性。每例被研究者應(yīng)用DEPC管留取血標(biāo)本5ml,應(yīng)用EDTA抗凝,于4℃條件下1000r/min離心10min,收集血漿存于DEPC管中,立即投入到液氮中冷凍,保存于-80℃冰箱中直到RNA分離；正常組織樣本取距腫瘤2.5cm以上正常膀胱粘膜,組織樣本獲取后30min內(nèi)用錫紙包裹裝入冷凍管,液氮冷凍,-80℃保存。采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測標(biāo)本中1miR-200c含量,以TRIzol提取RNA,基因特異性頸環(huán)形逆轉(zhuǎn)錄引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄完成后,應(yīng)用SYBR→Premix Ex TaqTM熒光試劑進(jìn)行相對定量研究,以U6RNA為內(nèi)參,計(jì)算miR-200c相對表達(dá)強(qiáng)度,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS17.0for windows統(tǒng)計(jì)軟件包,以student t檢驗(yàn)比較實(shí)驗(yàn)組和對照組中以及實(shí)驗(yàn)組中不同分期、分級的膀胱癌標(biāo)本中miR-200c相對表達(dá)水平差異,P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。繪制ROC曲線,計(jì)算曲線下面積,評估其靈敏度、特異度和總符合率。 結(jié)果 1.膀胱癌患者外周血中miR-200c表達(dá)水平與正常對照相比明顯升高(P=0.018)。 2. miR-200c的表達(dá)水平與TNM分期、分級情況存在相關(guān)性(P0.05),與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目等各臨床病理參數(shù)之間無顯著相關(guān)性(P0.05)。 3.血液樣本繪制ROC曲線,得出曲線下面積(AUC-ROC)是0.88。觀察到miR-200c診斷膀胱癌的靈敏度、特異度和總符合率分別為79.20%、77.30%及72.00%。 4.膀胱癌組織中與正常組織相比,miR-200c表達(dá)水平明顯升高,其診斷膀胱癌的靈敏度、特異度和總符合率分別為84.00%、82.90%及85.00%。 5.繪制—ROC曲線,結(jié)果顯示血液和組織中：-niR-200c預(yù)測浸潤性腫瘤的靈敏度和特異度均為47.10%和83.30%,曲線下面積相同為0.64；預(yù)測高級別腫瘤的靈敏度和特異度均為68.60%和73.90%,曲線下面積相同為0.71。 結(jié)論 1.外周血miR-200c表達(dá)水平與膀胱癌關(guān)系密切,與健康人群相比,異常高表達(dá),即單個(gè)上皮和腫瘤表達(dá)的miR-200c血液水平能夠區(qū)分膀胱癌患者和健康對照組。 2. miRNA-200c的表達(dá)水平與T分期、病理分級相關(guān),且在膀胱癌患者中,隨病理分級和臨床分期的增高,表達(dá)水平降低。提示miRNA-200c可能與膀胱癌的浸潤、轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。 3. miR-200c對膀胱癌診斷具有較高的靈敏度、特異度和總符合率,且組織中miR-200c的診斷性能要高于外周血。應(yīng)用外周血樣本具有方便獲取,減輕病人痛苦等獨(dú)特優(yōu)勢,但1miR-200c在膀胱癌診斷及預(yù)后評估方面的應(yīng)用尚需進(jìn)一步研究。 4.膀胱癌腫瘤組織中miR-200c表達(dá)水平較患者外周血中高,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；健康人群外周血與膀胱正常組織表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示miR-200c的表達(dá)水平與腫瘤相關(guān)。 5.組織和血液中miR-200c預(yù)測浸潤性和高級別腫瘤的診斷準(zhǔn)確性較低,在組織和血液中該預(yù)測能力相同,且預(yù)測高級別腫瘤的敏感度高于預(yù)測浸潤性腫瘤,但特異度稍低。提示miR-200c有望成為監(jiān)測腫瘤進(jìn)展的生物標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 崔秀英;郭運(yùn)杰;姚和瑞;;耐藥乳腺癌細(xì)胞株MCF-7/ADR中microRNA的分析[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年10期

2 王剛;;MicroRNA與膀胱癌[J];生命科學(xué);2010年03期

3 楊國良;薄雋杰;;尿液中膀胱腫瘤標(biāo)志物檢測的研究進(jìn)展[J];中國癌癥雜志;2009年07期

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本文編號：2542304