【摘要】：[目的]DDX39是RNA解旋酶DEAD-Box家族成員之一,它在體內通過調節(jié)基因表達和RNA代謝來發(fā)揮識別天然免疫功能、調節(jié)胞內信號通路、RNA轉錄與剪切以及調控核內表觀遺傳學等重要作用。而在不同腫瘤的調控過程中DDX39可以發(fā)揮抑癌或者促癌作用。DDX3 9在腎透明細胞癌(Clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中發(fā)揮的功能以及與患者臨床預后相關性尚需要進一步研究。通過我們的研究將為腎癌增殖轉移的形成提供新的理論依據(jù),為腎癌治療尋找新的基因靶點,并且探索一種可以預測腎癌患者療效和預后的新型分子標志物。[研究方法]1、通過Oncomine生物信息數(shù)據(jù)庫,初步驗證DDX39在腎透明細胞癌中的表達以及與預后關系。采用實時定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印跡(Western-blot)技術進一步驗證腎透明細胞癌的癌旁組織與癌組織、腎癌細胞株與正常腎小管上皮細胞株之間mRNA及蛋白表達的差異性。2.免疫組化染色腎透明細胞癌組織芯片,分析DDX39在腎透明細胞癌中的表達與患者預后相關性。3、利用siRNA (small interfering RNA)干擾和質粒轉染技術,分別敲低和過表達腎癌細胞株中的DDX39,通過RT-PCR和Western-blot驗證干擾和轉染效率,最終構建DDX39低表達和過表達的腎癌細胞株。采用CCK8法增殖實驗、平板克隆實驗、Transwell細胞遷移實驗、細胞侵襲實驗等來驗證DDX39低表達和過表達時腎癌細胞株的增殖、轉移能力。[結果]1、通過Oncomine數(shù)據(jù)庫檢索分析以及標本驗證,結果顯示DDX39在腎透明細胞癌中呈高表達,癌旁組織與癌組織、腎癌細胞株與正常腎小管上皮細胞株之間DDX39表達差異明顯。2.DDX39表達量與腫瘤的大小、TNM分期以及遠處轉移相關,單因素和多因素分析DDX39表達量與腎癌患者總生存期和無病生存期預后關系,DDX39可以作為腎癌預后獨立的預測因子,其表達量越高患者預后越差。3.用siRNA干擾技術和質粒轉染技術可以有效的敲低和過表達腎癌細胞株中DDX39。體外細胞功能實驗結果顯示,腎癌細胞株敲低DDX39后,細胞增殖和轉移能力被抑制,而過表達DDX39后,腎癌細胞增殖和轉移能力增強。[結論]DDX39在腎透明細胞癌中呈現(xiàn)原癌基因的特性,可以促進腫瘤增殖和轉移。DDX39有望成為預測腎癌預后的新型分子標志物以及成為腎癌基因靶向治療的新靶點。
【圖文】：

圖１－１邋ＤＤＸ３９邋ｍＲＮＡ在腎癌組織與正常腎組織間表達差異的Ｍａｔａ分析結果，逡逑ｐ邋?

Ｔｈｅ邋ｒａｎｋ邋ｆｏｒ邋ａ邋ｇｅｎｅ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｍｅｄｉａｎ邋ｒａｎｋ邋ｆｏｒ邋ｔｈａｔ邋ｅｅｎｅ邋ａｃｒｏｓｓ邋ｅａｃｈ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ａｎａｌｙｓｅｓ．逡逑Ｔｈｅ邋ｐ－Ｖａｌｕｅ邋ｆｏｒ邋ａ邋ｇｅｎｅ邋ｉｓ邋ｉｔｓ邋ｐ－Ｖａｌｕｅ邋ｆｏｒ邋ｔｈｅ邋ｍｅｄｉａｎ－ｒａｎｋｅｄ邋ａｎａｌｙｓｉｓ．逡逑圖１－１邋ＤＤＸ３９邋ｍＲＮＡ在腎癌組織與正常腎組織間表達差異的Ｍａｔａ分析結果，逡逑ｐ邋＜０？邋００１逡逑２．從Ｏｎｃｏｍｍｅ數(shù)據(jù)庫中共獲得７２例透明細胞癌標本的臨床信息，根據(jù)ＤＤＸ３９樣本逡逑中的ｍＲＮＡ表達量高低分成ＤＤＸ３９高表達組（高于中位表達量，ｎ＝３６）和ＤＤＸ３９低表逡逑達組（低于中位表達量，ｎ邋＝邋３６）。利用Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析法對比ＤＤＸ３９高表達組與逡逑低表達組生存差異，雖然結果沒有統(tǒng)計學意義（Ｐ＝０．０７１），，但是從生存曲線可以看出逡逑ＤＤＸ３９高表達組較低表達組有著更差的預后趨勢。逡逑＿邋１００－ｋｗ．．Ｊ？Ｕ）｜邋Ｌｏｗ邋ＤＤＸ３９逡逑嘗邐＊－１，邐ｉ－ｕ＊�。澹睿剑常跺义希蛇姟�？邋？邋？邋？邋Ｌ邋Ｌ邋—邋—邋—？逡逑３邐１邋邐邐ｕ￣逡逑＝５０－邐ｎ＝３６邐——－逡逑２邐Ｈｉｇｈ邋ＤＤＸ３９逡逑０逡逑＞逡逑°邐ｐ＝０．０７１逡逑0－ｌ邐１邐１邐１邐１逡逑０邐１０００邐２０００邐３０００邐４０００逡逑Ｆｏｌｌｏｗｕｐ邋Ｔｉｍｅ（Ｄａｙｓ）逡逑圖１－２邐Ｏｎｃｏｍｉｎｅ數(shù)據(jù)庫ＤＤＸ３９高表達組與低表達組間總體生存期差異
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

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