【摘要】：目的:探究囊性纖維化轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子(CFTR)氯離子通道功能障礙是否影響小鼠睪丸支持細(xì)胞骨架。方法:培養(yǎng)TM4小鼠睪丸支持細(xì)胞系,用1、5、10、20μmol/L的CFTR氯離子通道特異阻斷劑CFTRinh-172分別干預(yù)細(xì)胞48 h。CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞毒性,細(xì)胞免疫熒光法檢測TM4細(xì)胞骨架蛋白F-actin和Ac-tub的表達(dá)。實時熒光定量PCR(q PCR)檢測細(xì)胞間連接相關(guān)蛋白N-鈣粘蛋白、波形蛋白、粘著斑蛋白的表達(dá)。結(jié)果:20μmol/L濃度的CFTRinh-172對支持細(xì)胞有毒性。用不同濃度的CFTRinh-172處理TM4細(xì)胞48、72 h時,與細(xì)胞骨架密切相關(guān)的F-actin和Ac-tub的表達(dá)隨著CFTRinh-172濃度增加而減少(P0.05)。q PCR實驗結(jié)果顯示不同濃度CFTRinh-172對支持細(xì)胞N-鈣粘蛋白、波形蛋白和粘著斑蛋白mRNA表達(dá)沒有顯著影響。結(jié)論:CFTR氯離子通道對維持正常睪丸支持細(xì)胞骨架有著重要作用。CFTR氯離子通道功能的下降以及細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)下調(diào)有可能影響睪丸支持細(xì)胞的功能,進(jìn)而影響睪丸的生精功能。
【圖文】：

72組、5μmol/LCFTＲinh-172組、10μmol/LCFTＲinh-172組和20μmol/LCFTＲinh-172組共5組。培養(yǎng)48h后用酶標(biāo)儀檢測各組的A值，分別為(2．06±0．07)、(1．99±0．17)、(2．03±0．11)、(1．82±0．10)、(1．28±0．24)。發(fā)現(xiàn)10μmol/LCFTＲinh-172組A值略有下降，但是沒有統(tǒng)計學(xué)意義。而20μmol/LCFTＲinh-172組A值顯著下降，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05)。說明當(dāng)CFTＲinh-172達(dá)到20μmol/L時影響TM4細(xì)胞增殖活動，對TM4細(xì)胞有細(xì)胞毒性，故后續(xù)實驗未測試20μmol/LCFTＲinh-172組。見圖1。圖1CCK-8法檢測不同濃度CFTＲinh-172對TM4細(xì)胞生長活性的影響(n=3)與空白組相比，*:P＜0．05Figure1．EffectsofdifferentconcentrationsofCFTＲinh-172ontheviabilityoftheMT4cellsdetectedbyCCK-8assay(n=3)*:P＜0．05versustheblankgroup．2．2細(xì)胞免疫熒光檢測細(xì)胞骨架蛋白F-actin和Ac-tub的表達(dá)細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示在加入不同濃度CFTＲinh-17248h及72h后，TM4細(xì)胞骨架都有不同程度的收縮變短、瓦解，細(xì)胞間空隙變大。特別是5μmol/L及10μmol/L濃度時，細(xì)胞骨架回縮得更明顯。1、5、10μmol/LCFTＲinh-1723個濃度組的F-actin和Ac-tub熒光強(qiáng)度與對照組相比都有降低，，均有統(tǒng)計學(xué)差異。見圖2～5。圖2不同濃度CFTＲinh-172處理TM4細(xì)胞48h及72h后細(xì)胞骨架蛋白Ac-tub的熒光強(qiáng)度變化(n=3)與對照組比較，*:P＜0．05，＊＊:P＜0．01Figure2．ExpressionofAc-tubinthecytoskeletonoftheMT4cellsexposedtodifferentconcentrationsofCFTＲinh-172for48and72hours(n=3)*:P＜0．05＊＊:P＜0．01versusthecontrolgroup．圖3不同濃度CFTＲinh-172處理TM4細(xì)胞48h及72h后細(xì)胞骨架蛋白F-actin

淇障侗浯蟆Ｌ?別是5μmol/L及10μmol/L濃度時，細(xì)胞骨架回縮得更明顯。1、5、10μmol/LCFTＲinh-1723個濃度組的F-actin和Ac-tub熒光強(qiáng)度與對照組相比都有降低，均有統(tǒng)計學(xué)差異。見圖2～5。圖2不同濃度CFTＲinh-172處理TM4細(xì)胞48h及72h后細(xì)胞骨架蛋白Ac-tub的熒光強(qiáng)度變化(n=3)與對照組比較，*:P＜0．05，＊＊:P＜0．01Figure2．ExpressionofAc-tubinthecytoskeletonoftheMT4cellsexposedtodifferentconcentrationsofCFTＲinh-172for48and72hours(n=3)*:P＜0．05＊＊:P＜0．01versusthecontrolgroup．圖3不同濃度CFTＲinh-172處理TM4細(xì)胞48h及72h后細(xì)胞骨架蛋白F-actin的熒光強(qiáng)度變化(n=3)與對照組比較，*:P＜0．01Figure3．ExpressionofF-actininthecytoskeletonoftheMT4cellsexposedtodifferentconcentrationsofCFTＲinh-172for48and72hours(n=3)*:P＜0．01versusthecontrolgroup．·112·中華男科學(xué)雜志2016年2月第22卷第2期NatlJAndrol，Vol．22，No．2，F(xiàn)ebruary2016
【作者單位】： 北京大學(xué)第三醫(yī)院泌尿外科;北京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：北京大學(xué)985項目(2013-3-03)~~
【分類號】：R698.2

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本文編號：2528901