【摘要】：目的：研究黃連素對(duì)乏氧人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP體內(nèi)及體外的放射增敏作用并探討其可能的作用機(jī)制。方法：體內(nèi)：應(yīng)用MTT方法檢測(cè)黃連素對(duì)LNCaP細(xì)胞生存率的影響；通過細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，觀察不同濃度黃連素對(duì)LNCaP細(xì)胞放療敏感性的影響；采用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，免疫印跡法（WB）、免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HIF-1α、VEGF蛋白的表達(dá)變化。體外：建立前列腺癌LNCaP細(xì)胞裸鼠移植瘤模型；移植瘤平均體積增至約125mm3時(shí)，采用隨機(jī)數(shù)字表法將裸鼠24只分4組：對(duì)照組、單純藥物組（5mg/kg黃連素）、單純照射組（8Gy）、藥物+照射組（5mg/kg黃連素+8Gy）。36天后測(cè)量移植瘤體積，計(jì)算腫瘤體積抑制率，并對(duì)移植瘤標(biāo)本進(jìn)行Western blot檢測(cè)移植瘤組織中HIF-1α及VEGF蛋白的表達(dá)。結(jié)果：體內(nèi)：黃連素對(duì)LNCaP細(xì)胞有一定的毒性作用，并顯現(xiàn)劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，，24h時(shí)黃連素的IC50為220.36μM。經(jīng)克隆形成實(shí)驗(yàn)證實(shí)，黃連素對(duì)LNCaP細(xì)胞有明顯的增敏作用，并且隨著黃連素濃度的增加，放療敏感性增加，30μM、50μM的黃連素對(duì)LNCaP細(xì)胞的放射增敏比（SER）分別為：1.40、1.77。藥物聯(lián)合照射組的乏氧細(xì)胞凋亡率較單純照射組的乏氧細(xì)胞凋亡率明顯增加，并且隨著藥物濃度的增加，凋亡率增加；WB和免疫熒光結(jié)果均顯示藥物聯(lián)合照射組較對(duì)照組、單純藥物組和單純照射組的HIF-1α、VEGF蛋白的表達(dá)明顯降低，與單純照射組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。體外：藥物+照射組裸鼠移植瘤體積為（505.0±110.7）mm3，顯著低于單純藥物組（1384.2±182.0）mm3和單純照射組(1119.7±248.2) mm3（p＜0.05），其抑制率達(dá)74.3％。Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，藥物+照射組移植瘤組織中HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)水平較單純照射組明顯降低。結(jié)論：黃連素對(duì)乏氧人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞體內(nèi)及體外均有放射增敏作用，其機(jī)制可能與抑制HIF-1α和VEGF蛋白表達(dá)有關(guān)。這些研究結(jié)果表明黃連素可以作為前列腺癌放射的增敏藥物，也為黃連素的深入研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
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圖片說明： NCaP 細(xì)胞增殖的抑制作用 細(xì)胞存活率（%）12h 24h 48h 00±6.75 100.00±3.17 100.00±13.8 100.004±2.41 92.93±3.89 87.81±3.81 72.27±2±2.78 64.36±1.37 58.30±4.93 57.13±7±1.33 59.92±3.55 52.27±7.83 51.60±1±2.02 59.83±3.43 51.65±7.72 49.68±5±2.48 55.07±2.99 50.99±6.23 42.24±2±1.01 49.05±1.07 46.84±3.78 36.38±3±1.06 44.61±2.71 38.55±3.94 27.97±2±1.98 39.22±1.29 24.59±1.59 24.20±乏氧 LNCaP 細(xì)胞的放射增敏作用： 黃連素作用細(xì)胞放射敏感性，并呈現(xiàn)劑量依賴性。通過單擊多 1），計(jì)算出 30μM、50μM 黃連素的放射增敏比，由此可見，黃連素對(duì)乏氧的 LNCaP 細(xì)胞具有放，黃連素放射增敏比與黃連素的濃度呈正相關(guān)性
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圖片說明： 高的細(xì)胞存活率，更加準(zhǔn)確說明細(xì)胞凋亡的變化情況，因而我們選擇低于 7.9Gy的照射劑量，故凋亡實(shí)驗(yàn)選擇 6Gy 的照射劑量。圖2 細(xì)胞凋亡表3 細(xì)胞凋亡組別 凋亡率（%）常氧+IR 28.6±6.0乏氧+IR 1.2±0.7 乏氧+黃連素30μM+IR 4.2±1.6*乏氧+黃連素50μM+IR 11.9±3.0*，#注： 與常氧+IR組比較，p=0.0014，*與乏氧+IR組比較，p=0.0405、0.0038，#與乏氧+黃連素30μM+IR組比較，p=0.0170。4. 不同狀態(tài)下的LNCaP細(xì)胞中HIF-1α、VEGF表達(dá)的比較，如圖3
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 蔣昌斌;劉秀芳;賀玉香;牛道立;夏云飛;;DNA-PKcs反義寡核苷酸對(duì)不同p53功能狀態(tài)的鼻咽癌細(xì)胞株輻射抗性的影響[J];癌癥;2008年02期

2 ;Neutral sulfate berberine modulates cytokine secretion and increases survival in endotoxemic mice[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年09期

3 Jai-Sing Yang;Jau-Hong Lee;Wen-Tsong Hsieh;Jing-Gung Chung;;Berberine induces cell cycle arrest and apoptosis in human gastric carcinoma SNU-5 cell line[J];World Journal of Gastroenterology;2006年01期

本文編號(hào)：2514668