【摘要】：目的探討沉默鈣連蛋白(Calnexin)對腎母細胞瘤細胞凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、JNK信號通路的影響。方法將腎母細胞瘤SK-NEP-1細胞分為對照組、空載體組、實驗組。對照組正常培養(yǎng)不轉(zhuǎn)染。空載體組轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒,實驗組轉(zhuǎn)染Calnexin shRNA。轉(zhuǎn)染24 h后全部更換為正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48 h。采用實時熒光定量PCR法檢測各組Calnexin mRNA表達,TUNEL法檢測細胞凋亡指數(shù)(AI),Western blotting法檢測葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)、需肌醇酶1(IRE1)、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子2(TRAF2)、凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1(ASK1)、磷酸化凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1(p-ASK1)、c-Jun N末端激酶(JNK)及磷酸化c-Jun N末端激酶(p-JNK)蛋白相對表達量。結(jié)果 Calnexin mRNA相對表達量:實驗組、空載體組、對照組分別為0.28±0.01、1.01±0.06、1.00±0.08;實驗組低于空載體組和對照組(P0.05),但空載體組與對照組比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。AI:實驗組、空載體組、對照組分別為32.86±3.72、5.46±0.68、5.26±0.17;實驗組高于空載體組和對照組(P0.05),但空載體組與對照組比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。GRP78、IRE1、TRAF2、ASK1、p-ASK1、JNK及p-JNK蛋白相對表達量:實驗組高于空載體組和對照組(P均0.05),但空載體組與對照組比較無統(tǒng)計學差異(P均0.05)。結(jié)論沉默Calnexin可引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激并激活JNK細胞凋亡通路,進而促進腎母細胞瘤SK-NEP-1細胞凋亡。
[Abstract]:Objective To study the effect of calnexin on apoptosis and endoplasmic reticulum stress and JNK signaling pathway in renal cell tumor cells. Methods SK-NEP-1 cells were divided into control group, empty vector group and experimental group. The normal culture of the control group was not transfected. The empty vector group was transfected with a blank plasmid, and the experimental group was transfected with Calnexin shRNA. The expression of Calnexin mRNA in each group was detected by real-time fluorescence quantitative PCR, and the apoptosis index (AI) was detected by TUNEL method. The expression of glucose regulation protein 78 (GRP78), the desired inositol 1 (IRE1) and the tumor necrosis factor receptor-related factor 2 (TRAF2) were detected by the Western blotting method. The apoptosis signal regulates the relative expression of the kinase 1 (ASK1), the phosphorylated apoptosis signal modulating kinase 1 (p-ASK1), the c-Jun N terminal kinase (JNK), and the phosphorylated c-Jun N terminal kinase (p-JNK) protein. Results The relative expression of Calnexin mRNA: the experimental group, the empty vector group and the control group were 0.28, 0.01, 1.01, 0.06, 1.00 and 0.08 respectively; the experimental group was lower than that of the empty vector group and the control group (P0.05). The relative expression of GRP78, IRE1, TRAF2, ASK1, p-ASK1, JNK and p-JNK was higher than that in the control group (P <0.05). However, there was no statistical difference between the empty vector group and the control group (P <0.05). Conclusion Calnexin can induce endoplasmic reticulum stress and activate the apoptosis pathway of JNK cells, thus promoting the apoptosis of SK-NEP-1 cells.
【作者單位】： 海南省人民醫(yī)院;
【基金】：海南省自然科學基金資助項目(20168283)
【分類號】：R737.11

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本文編號：2506818