【摘要】：目的:1.體外實驗驗證NYZL1對膀胱癌細胞的增殖、遷移、凋亡等生物學(xué)行為的影響,為尋找靶向肽的受體提供參考信息。2.利用免疫熒光技術(shù),檢測FITC-NYZL1分子探針與膀胱癌細胞結(jié)合的特異性,為膀胱癌的靶向性治療提供理想載體。3.在上述實驗的基礎(chǔ)上,采集臨床病人的新鮮尿液,分析FITC-NYZL1分子探針標(biāo)記尿脫落細胞的特異性,為靶向肽的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:1.運用固相載體共價相連技術(shù)合成靶向肽NYZL1及其對照肽sv-NYZL1,肽段上標(biāo)記異硫氰酸熒光素并純化。通過MTT實驗、損傷修復(fù)實驗研究NYZL1對膀胱癌BIU-87細胞增殖和遷移能力的生物學(xué)影響;應(yīng)用流式細胞術(shù)技術(shù),分析NYZL1對BIU-87細胞的周期分布、凋亡情況的影響,探討NYZL1對BIU-87細胞生物學(xué)行為的影響。2.應(yīng)用掃描激光共聚焦顯微鏡檢測FITC-NYZL1與膀胱癌BIU-87、T24、5637、E-J細胞和腎癌KC細胞結(jié)合的特異性。3.收集臨床上膀胱癌患者新鮮尿液,純化尿液,加入FITC-NYZL1探針孵育,LSCM檢測探針與細胞的結(jié)合率,同時進行平行對照試驗,取新鮮尿液進行瑞-吉染色,通過細胞化學(xué)染色,檢測尿脫落細胞中癌細胞陽性率。結(jié)果:1.杭州中肽生化試劑公司合成NYZL1(CSSPIGRHC)短肽和sv-NYZL1(CRIGSPHSC)對照肽(對照肽的氨基酸序列及結(jié)構(gòu)與NYZL1相同,但組合順序不同),通過hplc及ms純化、鑒定,所合成環(huán)肽氨基酸序列合成肽的純度≥98%。經(jīng)fitc標(biāo)記,形成fitc-nyzl1探針和隨機對照探針fitc-svnyzl1。2.mtt實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,隨著肽段nyzl1濃度的升高,biu-87細胞與其結(jié)合呈現(xiàn)出的od值無明顯變化(p0.05),提示nyzl1對膀胱癌細胞的增殖無明顯抑制作用;細胞生長曲線顯示,與nyzl1結(jié)合的biu-87細胞生長趨勢與其它兩組無明顯差異(p0.05),nyzl1不直接影響腫瘤細胞的生長;損傷修復(fù)實驗結(jié)果顯示,單位時間內(nèi),實驗組劃痕區(qū)域細胞的生長面積與對照組和空白對照組無明顯差異,均表現(xiàn)細胞生長,biu-87細胞的遷移能力不受nyzl1的影響。3.流式細胞儀分析結(jié)果顯示,與對照組相比,nyzl1對膀胱癌biu-87細胞的周期分布無明顯影響(p0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。細胞凋亡結(jié)果顯示,與對照組相比,隨著nyzl1短肽濃度的升高,nyzl1作用后的細胞凋亡率無明顯差異(p0.05),nyzl1對biu-87細胞的周期分布與凋亡結(jié)果均無明顯影響。4.免疫熒光法鑒定nyzl1特異性的結(jié)果顯示,與對照組相比,fitc-nyzl1除了能與biu-87細胞結(jié)合,還可以和其他膀胱癌細胞結(jié)合,且各組間結(jié)合率沒有明顯差異(p0.05)。5.臨床實驗結(jié)果顯示,fitc-nyzl1可以標(biāo)記膀胱癌患者所有癌變的尿脫落細胞,且隨著膀胱腫瘤分期的升高,探針與細胞結(jié)合率也升高。對照組探針結(jié)合率較低,與實驗組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001)。結(jié)論:1.靶向肽nyzl1對膀胱癌細胞增殖、遷移、凋亡和細胞周期生物學(xué)行為無明顯影響。2.靶向肽nyzl1在膀胱癌細胞表面有特異性結(jié)合位點,具有顯著的癌細胞靶向性。這一結(jié)果為nyzl1的臨床應(yīng)用研究,nyzl1受體的篩選和鑒定提供了參考信息,我們可將nyzl1作為膀胱癌靶向性診斷和治療的候選分子應(yīng)用于臨床研究。3.fitc-nyzl1分子探針特異性結(jié)合膀胱癌細胞,能有效提高尿脫落細胞中膀胱癌細胞的檢出率。靶向肽標(biāo)記的尿脫落細胞有望成為膀胱癌無創(chuàng)診斷和臨床監(jiān)測的新技術(shù),為今后膀胱癌進行早期診斷和藥物靶向性治療研究奠定了理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14

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本文編號：2490846