【摘要】：膀胱癌是我國(guó)男性泌尿生殖系統(tǒng)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，具有對(duì)放化療耐受以及治療后易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，因此，我們需要尋找膀胱腫瘤新的治療策略。腫瘤干細(xì)胞在多種腫瘤中的相繼發(fā)現(xiàn)為我們研究膀胱腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及治療提供了嶄新的研究視角。研究表明，腫瘤干細(xì)胞具有自我更新和多向分化潛能，其中腫瘤干細(xì)胞可以通過(guò)對(duì)稱分裂和不對(duì)稱分裂，形成與母細(xì)胞性質(zhì)和功能完全一致的子代細(xì)胞，維持其自我更新；腫瘤干細(xì)胞中存在的突變可通過(guò)自我更新在細(xì)胞中代代相傳，保持腫瘤細(xì)干胞的致瘤性。這說(shuō)明自我更新是腫瘤干細(xì)胞致瘤的重要原因之一。 干細(xì)胞的自我更新受到多種途徑調(diào)節(jié)，干性基因在其自我更新中起重要作用，包括Oct4，Sox2和Nanog等轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)激活某些關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)控細(xì)胞增殖與分化的平衡，維持干細(xì)胞的未分化狀態(tài)。其中Nanog是最近鑒定的維持未分化胚胎細(xì)胞多能性和自我更新的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，在多種腫瘤中異常表達(dá)，其高表達(dá)可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖能力，且常伴隨不良預(yù)后。這提示Nanog可通過(guò)維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新能力導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，促進(jìn)腫瘤發(fā)展。在膀胱癌干細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)，膀胱癌干細(xì)胞同樣具有較強(qiáng)自我更新能力，并且伴隨Nanog的表達(dá)升高，提示我們Nanog可能參與了膀胱癌干細(xì)胞的干性維持。 目前關(guān)于Nanog在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中的作用尚不明確，為了研究Nanog在膀胱癌干細(xì)胞干性維持中的作用，我們首先采用Western Blot和免疫組化方法檢測(cè)Nanog蛋白在膀胱癌干細(xì)胞和46例膀胱癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Nanog在膀胱癌干細(xì)胞和組織中均為高表達(dá)，且其表達(dá)與組織的病理分級(jí)呈正相關(guān)；為深入探討Nanog在膀胱癌細(xì)胞中的作用，我們利用慢病毒載體，構(gòu)建了穩(wěn)定高表達(dá)外源Nanog的膀胱癌T24和5637細(xì)胞株；進(jìn)一步通過(guò)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察Nanog對(duì)膀胱癌細(xì)胞增殖的作用，采用懸浮成球技術(shù)檢測(cè)Nanog對(duì)膀胱癌細(xì)胞自我更新能力的影響，選取化療藥物順鉑，利用克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT法檢測(cè)Nanog對(duì)膀胱癌細(xì)胞耐藥性的影響，運(yùn)用裸鼠移植瘤模型分析Nanog在膀胱癌細(xì)胞致瘤性中所起作用，結(jié)果表明，，與對(duì)照組相比，高表達(dá)Nanog的T24和5637細(xì)胞克隆形成率上升，懸浮成球能力增強(qiáng)，對(duì)順鉑的敏感性降低，以及體內(nèi)成瘤能力增強(qiáng)。 本研究首次報(bào)道了Nanog在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中的表達(dá)變化，并從腫瘤干細(xì)胞特性角度探討Nanog與膀胱癌干細(xì)胞的干性維持的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Nanog通過(guò)影響膀胱癌細(xì)胞的增殖，自我更新，耐藥性和致瘤性，促進(jìn)膀胱癌干細(xì)胞的干性維持。為闡明Nanog基因與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系以及膀胱癌復(fù)發(fā)、耐藥的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，也提示Nanog可作為膀胱癌干細(xì)胞的新型標(biāo)志物，在臨床中，可作為膀胱癌的早期診斷分子以及個(gè)性化治療新靶標(biāo)，為膀胱癌的診斷，治療提供新思路。
[Abstract]:Bladder cancer is a malignant tumor with the highest incidence in male genitourinary system in China, which has the characteristics of tolerance to radiotherapy and chemotherapy and easy recurrence after treatment. Therefore, we need to find a new treatment strategy for bladder cancer. The successive discovery of tumor stem cells in many kinds of tumors provides a new research perspective for us to study the genesis, development and treatment of bladder tumors. Studies have shown that tumor stem cells have the potential of self-renewal and multi-directional differentiation, in which tumor stem cells can form progeny cells which are identical to the nature and function of mother cells by symmetrical division and asymmetric division, and maintain their self-renewal. Mutations in tumor stem cells can be transferred from generation to generation through self-renewal to maintain the tumorigenicity of tumor stem cells. This suggests that self-renewal is one of the important reasons why tumor stem cells are tumorigenic. Stem cell self-renewal is regulated by many ways, and stem genes play an important role in its self-renewal, including transcription factors such as Oct4,Sox2 and Nanog, which regulate the balance of cell proliferation and differentiation by activating transcription of some key genes. Maintain the undifferentiated state of stem cells. Among them, Nanog is recently identified as a key transcription factor for maintaining pluripotency and self-renewal of undifferentiated embryonic cells. Its high expression in a variety of tumors can enhance the proliferation of tumor cells, and often accompanied by poor prognosis. These results suggest that Nanog can promote tumor development by maintaining the self-renewal ability of tumor stem cells. In the study of bladder cancer stem cells, bladder cancer stem cells also have a strong ability of self-renewal, and with the increase of Nanog expression, it is suggested that Nanog may be involved in the dry maintenance of bladder cancer stem cells. At present, the role of Nanog in the carcinogenesis and development of bladder cancer remains unclear. In order to study the role of Nanog in the dry maintenance of bladder cancer stem cells, We first detected the expression of Nanog protein in bladder cancer stem cells and 46 cases of bladder cancer by Western Blot and immunohistochemistry. We found that Nanog was highly expressed in stem cells and tissues of bladder cancer, and its expression was positively correlated with the pathological grade of bladder cancer. In order to investigate the role of Nanog in bladder cancer cells, we constructed bladder cancer T24 and 5637 cell lines with stable and high expression of exogenous Nanog using lentiviral vector. Furthermore, the effect of Nanog on the proliferation of bladder cancer cells was observed by plate cloning assay, and the effect of Nanog on the self-renewal ability of bladder cancer cells was detected by suspension globulation technique. The chemotherapeutic drug cisplatin was selected. Clone formation test and MTT method were used to detect the effect of Nanog on the drug resistance of bladder cancer cells, and the role of Nanog in the tumorigenicity of bladder cancer cells was analyzed by using nude mice transplantation tumor model. The clone formation rate of T24 and 5637 cells with high expression of Nanog increased, the ability of suspension spheroidization increased, the sensitivity to cisplatin decreased, and the tumorigenicity of T24 and 5637 cells increased in vivo. In this study, we first reported the expression of Nanog in the carcinogenesis and development of bladder cancer, and discussed the relationship between Nanog and dry maintenance of bladder cancer stem cells from the point of view of the characteristics of tumor stem cells. It was found that Nanog could affect the proliferation and self-renewal of bladder cancer cells. Drug resistance and tumorigenicity promote the dry maintenance of bladder cancer stem cells. It lays a foundation for elucidating the relationship between Nanog gene and carcinogenesis and development of bladder cancer, as well as the mechanism of recurrence and drug resistance of bladder cancer. It is also suggested that Nanog can be used as a new marker of bladder cancer stem cells in clinical practice. It can be used as a new target for early diagnosis and individualized treatment of bladder cancer, and provide a new idea for the diagnosis and treatment of bladder cancer.
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.14

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2 健康時(shí)報(bào)特約記者 劉東邋鄒爭(zhēng)春;可抑制膀胱腫瘤復(fù)發(fā)[N];健康時(shí)報(bào);2007年

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4 孫健邋胡瓊珍;腹腔鏡下成功根治小兒膀胱腫瘤[N];健康報(bào);2008年

5 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院泌尿外科 陳明　(主任醫(yī)師) 吳葉青;膀胱腫瘤需要做哪些檢查[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

6 河南 主任醫(yī)師 張祥生;膀胱也常長(zhǎng)腫瘤[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

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8 北京同仁醫(yī)院泌尿外科主任醫(yī)師 劉躍新;膀胱腫瘤早診新技術(shù)[N];健康報(bào);2009年

9 代廷榮;無(wú)痛血尿要防腫瘤[N];中國(guó)石油報(bào);2003年

10 姚向陽(yáng);鈥激光無(wú)血切割膀胱腫瘤療效好[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

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本文編號(hào)：2472682