【摘要】：目的：RhoBTB家族屬于RhoGTP酶大家族的一員，與其他典型的Rho家族成員在控制細(xì)胞形態(tài)、調(diào)控細(xì)胞增殖、黏附、遷移和膜運(yùn)輸?shù)让鞔_的作用不同，RhoBTB亞族的功能雖然未能完全明確，但是一些研究已經(jīng)證實(shí)RhoBTB蛋白在致瘤過(guò)程中是通過(guò)降低或消除了某些基因的功能，從而引起蛋白功能失調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的改變。RhoBTB的研究不僅有利于深入對(duì)Rho家族的了解，而且更有助于揭示腫瘤的發(fā)病機(jī)制和腫瘤靶向藥物的研發(fā)。本課題旨在從分子，細(xì)胞，臨床病例三個(gè)層面初步探索RhoBTB3在腎透明細(xì)胞癌中的生物學(xué)效應(yīng)。 方法：通過(guò)定量RT-PCR方法，免疫組化以及Western印跡（Western blot法）檢測(cè)RhoBTB3在腎細(xì)胞癌和癌旁組織，以及腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系和正常腎小管上皮細(xì)胞系的表達(dá)情況。構(gòu)建pLVX-IRES-Neo-RhoBTB3和pLVX-IRES-ZsGreen-RhoBTB3慢病毒載體，包裝成慢病毒后感染786-o和HKC細(xì)胞系。 MTS方法檢測(cè)過(guò)表達(dá)和敲除腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系中RhoBTB3后的生長(zhǎng)曲線，通過(guò)劃痕試驗(yàn)和Transwell法測(cè)RhoBTB3對(duì)腎透明細(xì)胞癌的細(xì)胞侵襲和遷移的影響。通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)RhoBTB3過(guò)表達(dá)和敲除后對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞周期和凋亡的影響。 結(jié)果： RT-PCR，免疫組化以及Western印跡法顯示RhoBTB3在腎透明細(xì)胞癌組織和細(xì)胞株中表達(dá)水平明顯低于相應(yīng)的癌旁組織及正常腎小管上皮細(xì)胞系（HKC）（P值均＜0.05），過(guò)表達(dá)RhoBTB3后顯著促進(jìn)腎癌細(xì)胞786-O的細(xì)胞凋亡，在HKC中敲除RhoBTB3后促進(jìn)細(xì)胞從G1向S期轉(zhuǎn)化，促進(jìn)細(xì)胞增殖，并相應(yīng)促進(jìn)了HKC細(xì)胞的侵襲和遷移能力。 結(jié)論：RhoBTB3在腎透明細(xì)胞癌組織和體外細(xì)胞系中低表達(dá)。過(guò)表達(dá)RhoBTB3促進(jìn)細(xì)胞凋亡抑制細(xì)胞增殖，敲除后促進(jìn)細(xì)胞向S轉(zhuǎn)化，，促進(jìn)細(xì)胞增殖。RhoBTB3在腎透明細(xì)胞癌的惡性進(jìn)展中起到抑制作用，可為腎癌的分子靶向治療提供新的方向。
[Abstract]:Objective: the RhoBTB family is a member of the large family of RhoGTP enzymes. Unlike other typical members of the Rho family in the control of cell morphology, cell proliferation, adhesion, migration and membrane transport, the function of the RhoBTB subfamily is not completely clear. However, some studies have confirmed that RhoBTB protein may cause cell homeostasis by decreasing or eliminating the function of some genes during tumorigenesis. The study of RhoBTB not only contributes to the further understanding of the Rho family, but also leads to the change of cellular homeostasis. Moreover, it is helpful to reveal the pathogenesis of tumor and the development of tumor-targeted drugs. The aim of this study is to explore the biological effects of RhoBTB3 in renal clear cell carcinoma from three aspects: molecular, cellular and clinical. Methods: quantitative RT-PCR, immunohistochemistry and Western blot (Western blot were used to detect the expression of RhoBTB3 in renal cell carcinoma (RCC), paracancerous tissue, renal clear cell carcinoma cell line and normal renal tubular epithelial cell line. PLVX-IRES-Neo-RhoBTB3 and pLVX-IRES-ZsGreen-RhoBTB3 lentiviral vectors were constructed and packaged into lentivirus to infect 786 and HKC cell lines. MTS method was used to detect the growth curve after RhoBTB3 was overexpressed and knocked out in renal clear cell carcinoma cell line. The effect of RhoBTB3 on cell invasion and migration of renal clear cell carcinoma was detected by scratch test and Transwell assay. The effects of RhoBTB3 overexpression and knockout on cell cycle and apoptosis of renal clear cell carcinoma cells were measured by flow cytometry. Results: the expression level of RhoBTB3 in renal clear cell carcinoma tissue and cell line was significantly lower than that in corresponding paracancerous tissue and normal renal tubular epithelial cell line (HKC) (P) by RT-PCR, immunohistochemistry and Western blot. Overexpression of RhoBTB3 significantly promoted apoptosis of renal cancer cell line 786 O, and knockout of RhoBTB3 in HKC promoted cell transformation from G1 to S phase, cell proliferation and invasion and migration ability of HKC cells. Conclusion: the expression of RhoBTB3 is low in renal clear cell carcinoma tissues and cell lines in vitro. Overexpression of RhoBTB3 promotes apoptosis to inhibit cell proliferation, knockout promotes cell transformation to S, and promotes cell proliferation. RhoBTB3 plays an inhibitory role in malignant progression of renal clear cell carcinoma, which may provide a new direction for molecular targeting therapy of renal cell carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.11

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本文編號(hào)：2472246