【摘要】：目的:通過低濃度Ⅱ、Ⅳ型膠原酶聯(lián)合消化法從幼年SD大鼠睪丸中分離出睪丸間質(zhì)細(xì)胞(LCs),在含不同濃度的膽固醇的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),探討體外不同濃度的膽固醇對大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮的影響,為臨床上進(jìn)一步預(yù)防和治療性腺功能低下提供理論依據(jù)。方法:本研究分為兩個(gè)部分:第一部分:隨機(jī)選取健康4周齡雄性SD大鼠12只作為母體,采用低濃度Ⅱ、Ⅳ型膠原酶聯(lián)合消化法從幼年SD大鼠睪丸中分離出LCs,并對其純化、培養(yǎng)及鑒定。第二部分:將原代培養(yǎng)的LCs隨機(jī)分成對照組A及實(shí)驗(yàn)組B。對照組A又分為對照組A1和A2,實(shí)驗(yàn)組B分為實(shí)驗(yàn)組B1、B2、B3和B4。其中對照組A1加入標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基2(DMEM/F12培養(yǎng)液、胎牛血清5%、二抗10萬U/L,LDL-C 1.0ug/ml);對照組A2,為含有HCG(0.5IU/ml)的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基2;實(shí)驗(yàn)組B1:在對照組A1的基礎(chǔ)上分別加入低密度脂蛋白膽固醇(lipoprotein cholestero;LDL-C)0.2、0.5、1.0、5ug;實(shí)驗(yàn)組B2:在對照組A2的基礎(chǔ)上分別加入LDL-C 0.2、0.5、1.0、5ug;實(shí)驗(yàn)組B3:在對照組A1的基礎(chǔ)上分別加入氧化低密度脂蛋白膽固醇(oxidized lipoprotein cholesterol;ox-LDL-C)0.2、0.5、1.0、5ug;實(shí)驗(yàn)組B4:在對照組A2的基礎(chǔ)上分別加入ox-LDL-C 0.2、0.5、1.0、5ug。在培養(yǎng)24h后收取培養(yǎng)液,用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA)法測定睪酮,并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:第一部分低濃度Ⅱ、Ⅳ型膠原酶聯(lián)合消化法分離純化大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞1)采用0.1%Ⅱ、Ⅳ型膠原酶聯(lián)合消化法分離lcs的最佳酶解時(shí)間為1h左右。2)利用差速貼壁純化lcs的最佳貼壁時(shí)間為1-2h。3)培養(yǎng)24小時(shí)后,3β-hsd免疫熒光染色鑒定lcs,純度為98.1±1.5%,臺盼藍(lán)染色鑒定lcs存活率為97.3±1.6%。4)貼壁后培養(yǎng)12小時(shí)內(nèi),lcs即達(dá)分泌高峰,隨培養(yǎng)時(shí)間的延長,lcs分泌睪酮的能力逐漸下降。第二部分不同濃度的膽固醇對體外培養(yǎng)大鼠lcs分泌睪酮的影響1)實(shí)驗(yàn)組b1中:經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,與加入0.2ug、1.0ug及5.0ugldl-c組比較,加入0.5ugldl-c的培養(yǎng)基中,所含睪酮濃度最高,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對照組a1比較加入0.5ugldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度更高,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。加入0.2ug及1.0ugldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度與對照組a1中睪酮濃度比較,p0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。加入5ugldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度低于對照組a1中睪酮濃度,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2)實(shí)驗(yàn)組b2中:經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,加入0.5ug及1.0ugldl-c的培養(yǎng)基中,所含睪酮濃度最高,兩者之間比較,p0.05,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與加入0.2ug及5.0ugldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度比較,0.5ug及1.0ug組,睪酮濃度較高,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對照組a2比較,加入0.2ug、0.5ug及1.0ugldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度均顯著增高,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對照組a2比較加入5.0ugldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度明顯降低,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3)實(shí)驗(yàn)組b3中:與對照組a1比較,加入0.2ug、0.5ugox-ldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度均低于對照組a1中睪酮濃度,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,1.0ug及5.0ug組中睪酮濃度低于0.15ng/ml,低于標(biāo)準(zhǔn)曲線測量范圍,測量值可能存在較大誤差,故不做比較。4)實(shí)驗(yàn)組b4中:與對照組a2比較,加入0.2ug、0.5ug、1.0ug及5ugox-ldl-c的培養(yǎng)基中睪酮濃度均低于對照組a2,p0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,睪酮濃度隨加入的ox-ldl-c的增加明顯下降。5)實(shí)驗(yàn)組b1與實(shí)驗(yàn)組b2比較,可見實(shí)驗(yàn)組b2中利用ldl-c合成睪酮明顯增加,實(shí)驗(yàn)組b1中加入0.5ug組,睪酮濃度最高,實(shí)驗(yàn)組b2中,0.5ug及1.0ug組睪酮濃度最高,可見實(shí)驗(yàn)組b2可利用更高濃度的ldl-c合成膽固醇。結(jié)論:通過低濃度Ⅱ、Ⅳ型膠原酶聯(lián)合消化法可以獲得足夠多具高活性的高純度睪丸間質(zhì)細(xì)胞,并且LCs增殖能力較強(qiáng)。適當(dāng)增加LDL-C濃度可促進(jìn)體外培養(yǎng)的LCs合成睪酮,過高濃度的LDL-C則會抑制體外培養(yǎng)的LCs合成睪酮;HCG可以加強(qiáng)體外培養(yǎng)的LCs利用膽固醇合成睪酮的能力,增加LCs對高濃度的LDL-C的利用能力;低濃度的ox-LDL-C對體外培養(yǎng)的LCs合成睪酮存在抑制,其抑制能力隨濃度的增加而增加。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R697

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 靖俊;丁寧;丁曉萌;彭龍平;胡學(xué)春;趙子建;姚兵;;高脂飲食對雄性小鼠生殖功能和睪丸內(nèi)氧化低密度脂蛋白變化的影響[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2016年02期

2 陳允菊;湯玉華;;長期小劑量射線對放射作業(yè)人員血清中睪酮水平的影響[J];職業(yè)與健康;2016年02期

3 閆秀文;劉春;田翡;;堿性成纖維細(xì)胞生長因子在大鼠BMSCs向睪丸Leydig細(xì)胞分化中的作用研究[J];中華男科學(xué)雜志;2015年06期

4 李亮亮;于德新;謝棟棟;王毅;張濤;陳磊;張志強(qiáng);丁德茂;閔捷;鄒慈;;吸煙對雄性小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞、睪酮及精子數(shù)量的影響[J];中國男科學(xué)雜志;2015年03期

5 趙為民;楊建英;代濤;張功寶;袁德品;;小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞體外原代培養(yǎng)方法的建立[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年46期

6 鐘量;孫杰;陳凡凡;朱英堅(jiān);劉國華;;低濃度膠原酶差速消化法分離純化小鼠Leydig細(xì)胞的研究[J];中華小兒外科雜志;2010年09期

7 張紅娟;邵莉進(jìn);陳新磊;米梅艷;;大鼠睪丸間質(zhì)祖細(xì)胞的原代培養(yǎng)及生長狀況觀察[J];河北醫(yī)藥;2010年02期

8 畢宏達(dá);王曉云;周廣東;劉偉;李鳴;邢新;;大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)不同時(shí)間3β-羥基類固醇脫氫酶的表達(dá)[J];組織工程與重建外科雜志;2009年01期

9 張凱;賈雪梅;汪淵;王盛花;呂正梅;黃大可;桂麗;;高脂飲食對小鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)的影響[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

10 應(yīng)鋒;龔f3;孫佳音;沈潔;韓曉冬;;大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)、鑒定與功能監(jiān)測[J];中華男科學(xué)雜志;2008年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 區(qū)仕燕;錳暴露對工人腦神經(jīng)代謝物、血清神經(jīng)內(nèi)分泌激素和血尿金屬元素水平的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：2442065