【摘要】：前列腺癌是一種世界性的常見癌癥,嚴(yán)重威脅男性生活健康。微小RNA(micro RNAs)異常表達(dá)廣泛參與腫瘤的發(fā)生,mi R-340已被報(bào)道在不同癌癥類型中抑制腫瘤生長。然而,mi R-340是否在前列腺癌中發(fā)揮重要作用目前尚未見報(bào)道。因此本研究的目的是探索mi R-340在前列腺癌中的表達(dá)模式和其功能。然后驗(yàn)證mi R-340是否通過其靶基因HMGN5抑制前列腺癌增殖和侵襲,為前列腺癌提供了新的可能的治療靶點(diǎn)。本課題包括以下3部分:第一部分:mi R-340在前列腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)研究。第二部分:mi R-340對(duì)前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。第三部分:mi R-340靶基因及其腫瘤抑制機(jī)制初步研究。第一部分:mi R-340在前列腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)研究方法:1)收集標(biāo)本,包括20例前列腺癌癌組織與20例配對(duì)的癌旁組織標(biāo)本。2)使用RPMI 1640培養(yǎng)PC-3、22RV-1、DU-145和LNCa P前列腺癌細(xì)胞。RWPE-1正常人前列腺上皮細(xì)胞無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。3)采用RT-PCR檢測(cè)前列腺癌癌組織與癌旁組織標(biāo)本中mi R-340的表達(dá)水平,以及前列腺癌細(xì)胞系和正常人前列腺上皮細(xì)胞mi R-340的表達(dá)水平。結(jié)果1)與癌旁組織相比,前列腺癌組織中mi R-340的表達(dá)明顯下降。2)與正常人前列腺上皮細(xì)胞相比,前列腺癌細(xì)胞系mi R-340的表達(dá)明顯下降。結(jié)論:mi R-340在前列腺癌組織和癌細(xì)胞系表達(dá)均顯著下調(diào)。第二部分:mi R-340對(duì)前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響方法:1)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染mi R-340 mimics和anti-mi R-340至前列腺癌細(xì)胞考察增加或抑制者細(xì)胞中mi R-340表達(dá)對(duì)列腺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響。2)采用MTT法及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)mi R-340過表達(dá)及抑制mi R-340表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖的影響。3)采用TUNEL方法檢測(cè)mi R-340過表達(dá)及抑制mi R-340表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞凋亡的影響。4)采用western blot檢測(cè)mi R-340過表達(dá)及抑制mi R-340表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3表達(dá)水平的影響。5)應(yīng)用基于Transwell小室的侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)mi R-340過表達(dá)及抑制mi R-340表達(dá)對(duì)前列腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。結(jié)果:1)mi R-340過表達(dá)可以抑制前列腺癌細(xì)胞增殖,抑制其表達(dá)可以誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞增殖。2)mi R-340過表達(dá)可以抑制前列腺癌細(xì)胞克隆形成,抑制其表達(dá)可以增加前列腺癌細(xì)胞克隆形成。3)mi R-340過表達(dá)可以促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞凋亡,沉默mi R-340表達(dá)可以抑制前列腺癌細(xì)胞凋亡。4)mi R-340過表達(dá)可以抑制前列腺癌細(xì)胞侵襲,沉默mi R-340表達(dá)可以促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞侵襲。結(jié)論:在前列腺癌細(xì)胞中mi R-340過表達(dá)能夠顯著抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡、抑制其侵襲能力。第三部分:mi R-340靶基因及其腫瘤抑制機(jī)制的初步研究方法:1)構(gòu)建含有野生型和突變型HGMN5 3’UTR的mi R-340結(jié)合元件的熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒,與mi R-340 mimics或anti-mi R-340共轉(zhuǎn)染至DU-145細(xì)胞考察HMGN5是否是mi R-340的直接靶基因。2)采用熒光定量PCR檢測(cè)mi R-340 mimics或anti-mi R-340對(duì)HMGN5m RNA表達(dá)的影響。3)采用Western blot檢測(cè)mi R-340 mimics或anti-mi R-340對(duì)HMGN5蛋白以及Bcl-2,cyclin B1和MMP9蛋白表達(dá)的影響。4)共轉(zhuǎn)染HMGN5和mi R-340 mimics考察HMGN5過表達(dá)對(duì)mi R-340mimics誘導(dǎo)的前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。5)Spearman分析前列腺癌組織中HMGN5 m RNA的表達(dá)與mi R-340表達(dá)水平相關(guān)性。結(jié)果:1)mi R-340可直接靶向HMGN5基因。2)mi R-340過表達(dá)明顯降低前列腺癌細(xì)胞HGMN5 m RNA及蛋白的表達(dá)。相反,抑制mi R-340能明顯增加HGMN5 m RNA及蛋白表達(dá)。3)mi R-340過度表達(dá)明顯抑制前列腺癌細(xì)胞Bcl-2、cyclin B1和MMP9蛋白的表達(dá)。相反,沉默mi R-340可增加這些蛋白表達(dá)。4)mi R-340過表達(dá)抑制前列腺癌細(xì)胞增殖和侵襲的作用可以被HMGN5過表達(dá)所逆轉(zhuǎn)。5)前列腺癌組織中HMGN5 m RNA的表達(dá)與mi R-340得表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)。結(jié)論:確定HMGN5為前列腺癌細(xì)胞mi R-340的直接靶基因,mi R-340過表達(dá)通過負(fù)調(diào)控HMGN5抑制前列腺癌細(xì)胞致腫瘤潛力。我們首次報(bào)道了mi R-340在前列腺癌中的關(guān)鍵作用以及mi R-340和HMGN5的直接關(guān)系。因此,本研究不僅提供了前列腺癌的腫瘤發(fā)生的分子基礎(chǔ),而且還提示了前列腺癌的潛在治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2428694